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T载体是什么抗性的
t载体什么抗性
答:
Amp抗性
。T载体又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的zd载体分子与外源DNA分子进行连接。T载体的抗性是AMP抗性,amp是β内酰胺类抗生素,内酰胺环会被质粒amp抗性基因表达的酶切割断裂。
标记基因
答:
以最简单的大肠杆菌T克隆为例,
T克隆中常用的T载体上带有一个青霉素抗性基因
,然后还有一个β-半乳糖苷酶N端141个氨基酸的编码基因(LacZ'),而我们常用的大肠杆菌表达系统中所使用的工程菌,它们的基因组里面本身含有β-半乳糖苷酶C端其他氨基酸序列的编码序列。但无论是质粒载体上的N端片段也好还...
假如一特异PCR扩出的基因或基因片断重组进
T载体
并转化大肠杆菌,如何...
答:
制备蓝白筛选的平板,
一般的T载体我们都会选择氨苄抗性的板子来涂平板
,因为氨苄的比卡那的板子好长,因为你是PCR扩增出来的,所以推荐你使用大号的平板以获取更多的菌落,将IPTG(1mol/L浓度)取4-8微升,取用二甲基甲酰胺溶解的浓度为100微摩尔每升的X-Gal,50-80微升,将两者混匀之后均匀得涂到含...
什么是t载体
答:
通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD-18
T载体
构建了质粒pMD-18Tman2XcmI,克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI 酶切位点;用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XcmI可以制备T载体.因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制,甘露聚糖酶能够表达,从而水解甘露聚糖产生水解圈,指示转...
不同双元
载体
上的
T
-border序列(L-border和R-border)一样吗
答:
(基因,载体,表达载体,农杆菌)] 各位战友,想请教下一个载体构建的问题。我目前有一个农杆菌是抗卡那
抗性的
,而我的一个植物表达载体也是具有卡那抗性,这样当该载体转入到农杆菌的时候很难确定该载体的转入,且在以后的摇菌上有很大的麻烦。所以我想把
T载体
上的amp基因插入到这个植物表达载体中,但是...
克隆
载体
不是不能够表达外源基因吗 没有sd序列,但是为
什么
它能够表达自 ...
答:
例如
T载体
。外源片段通过插入到lacZ基因中,破坏了lacZ,最后lacZ无法表达,证明有外源序列插入。之前的原件肯定是需要能保证lacZ基因表达的。只是这种表达通常都是由诱导型启动子控制的,所以如果只是克隆,不进行诱导,外源基因也不会表达的。而载体上的
抗性
基因,应该是有一些组成型的启动子调控。下面有...
蓝白斑筛选过程中,
T载体
:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,连接条件4度过夜过...
答:
--蓝白斑筛选过程中,
T载体
:DNA=1:4,DNA为PCR纯化产物,--如果是摩尔比没
什么
问题。其实只要目的片段摩尔数高于载体就会有很好的结果。但是如果产物量太大,则会有不良的效果。根据你的问题 1:检测纯化产物。出了问题后纯化产物一定要走电泳查看,确认回收效率。2:连接的产物量不用太大。3000bp的T...
真核生物(如小鼠)的质粒如何提取,请写下详细步骤,谢谢
答:
1.3.3 质粒pGEM-IgG的构建:将IgG Fc的PCR产物与pGEM-T质粒进行TA连接反应,即10μl PCR产物加2μl的pGEM-T载体加10 U的T4连接酶,16 ℃过夜。取2μl的连接产物以氯化钙法转化大肠杆菌DH5α,用蓝白斑方法挑选含氨苄
青霉素抗性
的白斑克隆,在3 ml LB培养基(含氨苄青霉素100 μg/ml)中37...
请教
载体
构建的问题!
答:
5.连接体系是否正确。这步是最关键,也是最容易出错的一步。载体和目的片段的摩尔数比应为3:1到10:1之间。可以先通过跑胶确定两者浓度,再通过两者碱基数确定其需加的量。6.另外,还要确认
载体抗性
,转化时看有没涂错板子。希望我的回答可以为你提供帮助O(∩_∩)O~如果还不可以,再问吧~...
基因克隆的方法主要有哪几种,简述各种方法的原理和用途
答:
选择合适(
抗性
标记、酶切位点等)的克隆载体(为了保真扩增),并将PCR片段连接入克隆载体中;(一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性
T载体
直接相连)将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增;从大肠杆菌中提取质粒(即前面的...
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