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T载体克隆
手拆sanger测序套峰结果
答:
在获取单细胞
克隆
并将将细胞扩增后,一般我们会按照以下顺序准备两种样本:(1)提取上述细胞的基因组DNA,由高保真DNA聚合酶扩增的,含有gRNA ontarget位点的DNA片段。强调 一定要是高保真酶P出来的序列 ,我们 通过观察PCR产物峰图 来挑选进一步验证的单细胞克隆。(2)将该DNA片段通过解链,与
T载体
连接...
PCR纯化产物与
T载体
连接后放置多长时间不影响转化呢
答:
短片段连完直接转化掉是最保险的。长片段有些需要过夜连接。一般24-36小时足够了。现在有些公司有
T载体
快速连接酶,说明书上说20-30分钟就可以了。有基因
克隆
方面的需要可以咨询百替生物哦,我们专业提供生物医药技术服务。
载体
构建摩尔比怎么算
答:
问题五:
T载体
如何制备 用限制性内切酶制备T载体 陆哲明,柯 杨△[北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室,北京 100034][关键词]T载体;DNA限制酶类;遗传载体;基因扩增[摘 要]目的:介绍一种制备T载体的方法。方法:用限制性内切酶XcmⅠ酶切,在两端产生T末端,制备的T载体可直接用来
克隆
用...
我的目的基因550bp,载体为
T载体
,连接后转菌挑单
克隆
,菌液PCR条带在1000...
答:
正常情况应该是750bp,其他的都不是,可以忽略不记
...我看到你关于平末端PCR产物加A的方法。请问加A后是直接转
T载体
...
答:
T载体
是比较老的方法了 它的做法是PCR产物纯化后进行加A尾巴,然后再进行T载体链接 现在有多种无缝连接
克隆
技术
如果用Spel和Sacl将目的基因从
T载体
上切下来,准备连入表达载体pUBI-Z...
答:
从
T载体
切下后,切胶回收。用相同的酶切表达载体,使目的片段和表达载体具有相同的粘性末端,后按照正常的连接操作进行即可。
基因连入
T载体
后再连入载体2301,步骤是什么?
答:
你的目的基因两端加了酶切位点么?或者目的基因转录序列的外侧有没有酶切位点?有的话双酶切再连接。没有的话建议你设计带酶切位点的接头,然后再连到
T载体
上去。这样。你先把含T载体的菌摇起来,提质粒,双酶切,割胶回收酶切片段(小的那一段,就是你要的基因)。2301载体你看看有没有那两...
含有NdeⅠ和EcoR Ⅰ酶切位点的复制
载体
和表达载体
答:
根据我们实验收藏,原核表达载体Pet-28a比较复合你的要求,而复制载体一般用
T载体
吧。如果你要的是真核表达载体,我查看了PCMV系列的,都没有Ndel的多
克隆
位点。不太适合,不过Ndel这个限制性内切酶如果可以尽量少用,改有其他酶切位点要好点。
我有一个基因片段老是正向连接到PMD18-
T载体
上,我现在想要它反向连接...
答:
要么你像楼上说的那样,做定向
克隆
;我想你的本意就是要避免换个引物再亚克隆一次,所以你只能多筛一些克隆,可以用 M13F+你特异基因的F引物 批量做菌落PCR验证(或M13R+特异基因的R),扩出条带就是反向插入了。如果P了上百个克隆还 没有,劝你放弃吧,还是定向克隆吧。
双酶切鉴定(或者测序)是否含有目的基因的时候,为何用pMD18-
T载体
?
答:
通常先分析一下目的基因上存在哪些常见的酶切位点,再选择合适的
克隆载体
.保证你双酶切的位点在目的基因上不会出现.PMD18-
T克隆
位点两侧的酶切位点比较多,很常用的.
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