贵阳市交通运输局的主要职责是严格执行国家在交通行业的方针、政策和法规，制定并实施全市公路、水路交通的长期发展战略和政策。其中，主要包括:
规划与实施: 制定行业发展规划和年度计划，监督公路、水路交通的实施，并负责行业统计与信息引导，参与战备支前运输。
市场管理: 指导交通行业改革，管理交通运输市场和基础设施建设市场，维护公平竞争，调控运力，推动行业结构优化和协调发展，指导交通行业协会工作。
运政与路政: 统一管理公路、水路运输，包括小轿车定线客运、旅游客运、汽车租赁、特殊物资运输等，对重点物资和紧急运输进行调控。
基础设施建设: 负责市属交通设施的建设、维护和质量管理，执行重点公路、水路交通工程及站场建设项目。
规费征收与审计: 管理公路、水路收费站（卡）设置，负责规费征收稽查和审计监督。
行业监管: 管理汽车维修市场、驾驶学校和驾驶员培训，实施汽车综合性能检测，水上港航监督、船舶检验和船员管理。
法规与科技: 起草交通法规，监督技术标准，组织科技项目攻关和成果推广，指导技术引进和创新。
国际交流: 协调涉外工作，管理与国际组织的交通合作事宜。
人事与队伍: 负责系统内机构编制、干部人事和劳动工资管理，指导行业职工队伍建设。
最后，贵阳市交通运输局还负责完成市委、市政府及上级业务部门交办的其他相关任务。