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配制DNA连接反应体系中,如何确定目的基因与载体DNA的量以确保高的连接效率?
如题所述
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第1个回答 2020-04-25
在做目的基因的提取的时候可以使用荧光pcr来检测目的基因的含量。
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DNA连接反应中如何确定
供体DNA
与载体DNA的
加入
量?
答:
关键要看你载体、目的片段的大小以及跑胶出来的亮度
,还有MARKER。比如载体4kb,片段2kb,1bpDNA约660D,你对ligase照说明书可以算一下需要多少微摩,再算一下需要多少ngDNA。再看跑的胶,比如点了5ul的marke5kb条带是100ng,亮度和载体相同,是目的片段的两倍,那么载体一共大概有100ng,目的片段50...
要配置多少的酶切
体系,载体和
插入
DNA的量
要加多少?
答:
一般在酶切体系里
,DNA的量
是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切
体系中
的DNA尽量多加一些.这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多,有利于后期
的连接
以及筛选.具体的话,
如何
提高
目的基因与载体连接的效率
答:
目的基因具有从起始密码子到终止密码子的方向性,必须正向连接才能获得正确克隆,构建的载体才能正确表达目的蛋白。相同的限制性核酸内切酶及DNA连接酶。前者在供体和受体上分别进行切割,使
目的基因的
两端与运载体有相同的粘性末端
,DNA连接
酶则将其连接。要构建重组
载体的
目的就是把目的基因连到载体上,所以...
如何
提高
目的基因和载体的连接效率
答:
为了防止目的两端及载体的两端连接在一起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止
目的基因和载体的
自连。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
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基因工程目的基因的检测
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