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连接体系载体与片段比例
载体片段连接体系
如何计算
答:
载体片段连接体系
按照2比计算。根据查询相关公开信息显示,载体片段中的连接体系需要与载体片段按照2比1的比例公式进行均分计算。
连接体系
中,
载体与
外源基因的
比例
关系是固定不变的吗,什么时候可以颠倒...
答:
不是固定不变的,但
比例
颠倒会影响合成效率!理论上
载体和片段
应该是1:1的关系,然而化学反应本身是分子间的反应,载体质量大于片段,混合均匀时,假设二者分子拥有一致的动能,显然根据E=mv²/2,质量更小的片段拥有更高(同时复杂)的运动!所以分子碰撞的原因,更依赖于速度更大,布朗运动更复杂的片段,片...
连接
反应中如何调整
载体与片段
的
比例
答:
T
载体
应该很容易连接啊。
连接体系
要小,一般10ul足够了,再说你还是用的商业感受态。还有你PCR产物是否检测过,用的是什么聚合酶,有的高保真聚合酶没有加A特性的。PCR回收的产物浓度如何?跑出带太淡了,或者产物太大也会连不上。最好告诉我你连的大小到底多少bp。连接时间是否过短呢,回收的PCR产物...
连接体系
转化所培养出的菌落是否均是目的
片段与载体
重组的质粒转化所形...
答:
连接体系
转化所培养出的菌落是否均是目的
片段与载体
重组的质粒转化所形成的菌如下:构建载体时,转化过后不长菌的原因:转化的时候有误,可以重新实验。目的基因和载体都切开,特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起,感受态的效率问题,转化过程对不对,如抗生素加的...
t4连接酶
连接体系
怎么计算
答:
最适克隆
载体
/插入
片段
摩尔比。经查询t4连接酶
连接体系
的相关资料得知,t4连接酶连接体系计算公式为最适克隆载体/插入片段摩尔比。T4-DNA连接酶即T4DNA连接酶,可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合。
目的
片段
与表达PET-30a
载体连接
后转化总是不长菌怎么回事?
视频时间 1:10
请教
载体
构建的问题!
答:
5.
连接体系
是否正确。这步是最关键,也是最容易出错的一步。
载体和
目的
片段
的摩尔数比应为3:1到10:1之间。可以先通过跑胶确定两者浓度,再通过两者碱基数确定其需加的量。6.另外,还要确认载体抗性,转化时看有没涂错板子。希望我的回答可以为你提供帮助O(∩_∩)O~如果还不可以,再问吧~...
请教,关于KPn1高温灭活纯化
和
T4
连接
酶
体系
的生化问题
答:
自己回答:现在
连接
的
体系
应该是没什么问题,可能是双酶切的时候没有完全把位点切开,毕竟两种酶在共用buffer的情况下存在竞争,虽然之前做过交叉试验验证了可行性。目前的计划是分别单酶切后纯化,保证能切开。 我们采用的摩尔比是
片段
:
载体
=3:1,理论是可行的,T4 ligase的效率是可信的。总之,还要...
做链接时目的基因
和载体
的量控制在多少?
答:
数量一般在 目的基因:
载体
=5:1-10:1。双酶切的话,目的基因多加点没关系。目的基因越小,越往10:1上靠;目的基因
片段
大,反之。不过现在有很多种
连接
方法,
体系
不同,具体你还是要参考连接酶的说明书的。
【求助/交流】请问大家:将外源DNA与
载体连接
的
体系
怎么确定啊?_百度...
答:
walker2898(站内联系TA)
体系
一般用10微升体系,具体构成得根据你的DNA和载体的浓度,测浓度可以电泳进行粗估,根据条带的亮度和marker的亮度进行比对确定浓度,一般
载体和
DNA的浓度比在1:3-1:8都可以,宝生物的一般T4DNA
连接
酶最好16度过夜连接,转化时加5微升即可。nuoyaeva(站内联系TA)...比如我用...
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