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连接的时候片段和质粒比例
大肠杆菌
连接
载体
片段比例
答:
您是想问大肠杆菌连接载体片段比例是多少吗?
这个比例为1:3或1:5
。通过查询大肠杆菌的质粒信息,目标基因片段与载体DNA的比例应该是1:3或1:5左右,这样可以确保目标基因片段被充分插入到载体DNA中,同时避免过多的目标基因片段导致载体DNA的破坏或不稳定。具体的比例需要根据实验需要进行优化,这个比例...
如何确定插入
片段
的用量
和质粒
载体的量
答:
一般参考T4连接酶的说明书,
大多数人做的是插入片段:载体=3:1至5:1
,是分子数的比值。可以先测出两者的质量浓度(分光光度计或者跑电泳),然后根据分子量大小可以算出。
问一个分子生物学的问题,
片段连接
答:
1.片段略长了些,增加了连接的难度,
建议连接时控制一下载体和片断的摩尔比例1:3~1:10
,载体的量尽量少些。2.你的片段如果是PCR产物双酶切后用于连接,建议酶切时间长一些,以保证能完全切开,也就是说你得连接过程要保证没有问题。3.如果一种感受态菌株不行的话,建议你试试其它菌株。4.你得...
t载能
连
大
片段
吗
答:
t载能连大片段。用Taq酶做PCR是会在PCR产物两条链的3端加上一个A,基于此原理产物能通过t4DNA
连接
酶连入T载体,连载体时,产物的量要比载体的量大,一般
比例
要求在3比1及以上,2kb
的片段
还不算大太,一般还好连。t载能连大片段的方法 不知你PCR后有没有对回收产物测浓度,如果浓度过低,可以...
感受态
与质粒的比例
答:
100-500ng/uL。质粒转化不少于10的5次方,连接产物不少于10的6次方
。 两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时。但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理。增加收菌次数,相对提高了质粒的量,
连接
反应中如何调整载体
与片段的比例
答:
一般10ul足够了,再说你还是用的商业感受态。还有你PCR产物是否检测过,用的是什么聚合酶,有的高保真聚合酶没有加A特性的。PCR回收的产物浓度如何?跑出带太淡了,或者产物太大也会连不上。最好告诉我你
连的
大小到底多少bp。连接时间是否过短呢,回收的PCR产物是否质量过低。这些你都应该考虑。
载体
与片段
的摩尔
比例
如何计算
视频时间 1:10
三段融合pcr的
比例
答:
50~100:1比例。在最初的10~15个循环中主要产物还是双链DNA,三段融合pcr
的比例
是50~100:1。目的融合PCR是一种常用的构建重组
片段
或重组
质粒
的手段。
重组
质粒
构建的注意事项?
答:
在这里将我的心得分享于大家,这也是我本人几年来一线工作
时
的经验积累,以期能为谷友提供借鉴,让大家在实验中少走弯路。所涉及内容如下:1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3)
连接片段
浓度比的问题 在阐明上述问题同时,本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。一、克隆基因的酶切...
影响
质粒
转染效率的因素有哪些?
答:
4、质粒与转染试剂
比例
:在一定范围内,转染效率
与质粒
/转染试剂比值成正相关,但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。5、细胞状态:维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳,此时期的细胞生长旺盛,可能得到更高的转染效率,切勿选择传代...
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