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连T载体
构建重组质粒之前为什么先
连接t载体
答:
先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化
,容易连接片段(也就是效率较高),因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确(商业化的缘故),因此测序也方便一些。更重要的是,T载体往往设计了蓝白斑筛选的功能,插入片段的载体会呈现白色,这样也容易...
...假如我有有一个基因片段,未知序列。我可以把它连接到
T载体
...
答:
T载体分两种。
一种是末端带有A的典型的T载体,这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接,另一种是平末端的T载体
,这种T载体末端没有A,它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接,因为你的序列是未知的,为保万无一失,建议你最好先用taq给它处理下,即末端加A然后再和含...
T载体
是质粒载体吗
答:
PCR产物一般和 T载体相连,
T载体是一种线性载体,和你的目的片段连接以后,就变成了 圆形的质粒
。 T载体的种类很多,takara的书上有很多介绍。
T载体
连接问题
答:
1、T载体连接有问题,重新调整目的片段和T载体的比例,重新连接
。2、PCR某种试剂出问题了,以前有个师姐就是这样,怎么也扩不出来,让别人带样扩出来了,原来是Taq 酶出问题了,你也可以确定一下。
为什么pcr产物要先连在
t载体
上
答:
T载体是一种克隆载体
,链接后先得到较多的拷贝,可以提高链接表达载体的效率。
为什么pcr产物可以直接
连t载体
答:
普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A,线性化平末端
T载体
的两端分别又人工加上一个额外的T碱基,从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对,提高了PCR产物连接和克隆的效率。
3K的PCR片段
连T载体
,怎么连才好连
答:
第一,先确定聚合酶能不能末端加A,如果不想,用cDNA做模板pcr,末端加上A。第二,合适的比例,你这个建议mol比1:1连接。连之前先在65度的水里浴下,混匀后加连接酶。
t载体
连接原理
答:
详细来说,
T载体
是一种特殊设计的线性DNA分子,其末端带有一个突出的单链T(胸腺嘧啶)碱基。这个突出的T碱基可以与目的DNA片段末端的A(腺嘌呤)碱基进行互补配对,形成TA配对。这种TA配对是基于DNA碱基互补配对原则(A-T,C-G)的一种特殊情况。在连接反应中,DNA连接酶会催化T载体与目的DNA片段之间...
pcr产物胶回收浓度低,能不能和
T载体
连接
答:
可以,不过浓度太低的话会导致
载体
自连的比例增加,挑去单克隆后提取的质粒可能是空载的概率增加
含粘性末端的目的片段能与
T载体
相连吗
答:
T
克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T-克隆
载体
(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端...
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