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PCR扩增中退火温度由谁决定
退火温度
的高低由什么因素
决定
答:
退火温度是影响PCR反应特异的重要因素。
引物与模板复所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度
。引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异扩增上升。相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异,...
PCR
反应
退火温度
的高低与什么因素有关
答:
退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素
。
引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度
。引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升。相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异性,但会引起...
pcr
过程
中退火温度
是什么
决定
的
答:
另一种说法:熔解温度(Tm)是引物的一个重要参数.这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定
PCR
退火温度是必需的.在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合.合理的
退火温度从
55℃到70℃.退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃...
做
pcr
,如何确定最佳
退火
及延伸的时间和
温度
?
答:
退火温度根据引物来决定
一般先用55° 不行的话再往下降
PCR退火温度
是多少?
答:
退火温度需要从多方面去决定
,
一般根据引物的Tm值(Tm值=4(G+C) +2(A+T))为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度
。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。2、延伸时间:1min/kb(10kb内)。引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度)。但在扩增长度较短且退火温度...
PCR
反应
退火温度
的高低与什么因素有关
答:
退火温度在PCR
反应中扮演着关键角色,它直接影响着反应的特异性。主要受到引物的长度、碱基组成和浓度的影响。引物越短,G+C含量越低,所需的退火温度就越低,但过低可能导致非特异性
扩增
增加。提高退火温度虽然提高特异性,但可能降低扩增效率。退火温度通常通过Tm公式估算,然后减去5℃以优化反应设计。PCR...
PCR
反应
退火温度
的高低与什么因素有关
答:
退火温度在PCR
反应中起着关键作用,它直接影响反应的特异性。这个温度的设定受到多个因素的影响,主要包括引物的特性。首先,引物的长度和碱基组成影响退火温度。一般来说,较短的引物和G+C含量较低的引物,其退火温度可以设定得较低。然而,这可能导致错配增加,非特异性
扩增
的风险增大。为了平衡特异性与...
关于
PCR的
问题??
答:
2、引物退火(Primer annealing)
退火温度
一般需要凭实验(经验)
决定
。退火温度对
PCR的
特异性有较大影响。3、引物延伸 引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度)。延伸时间随
扩增
片段长短而定。4、循环中的变性步骤 循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性:变性时间过长损害酶活性,过短靶...
退火温度
低会对
PCR
产生什么影响?
答:
通常来说,
退火温度
是由引物的GC%含量
决定
的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度(如Mg,Na等离子浓度)。建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的
PCR
体系中的引物退火温度,而不是仅仅由公式计算得出。一般情况下,退火温度过低只会导致反应体系中引物...
pcr
实验中主要筛选
退火温度
的原因是什么
答:
这一阶段模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合,而新合成DNA链的起点,是有加入到反应混合物中的一对寡核苷酸引物在模板DNA链两端的
退火
位点
决定
的
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9
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