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特异扩增PCR的用途
在生物实验中
PCR的
具体步骤是什么?
答:
(2) 复性过程采用的温度至关重要如果复性温度太高,寡核苷酸引物不能与模板很好的复性,扩增效率将会降低。如果复性温度太低,引物将产生非
特异
性复性,从而导致非特异性的DNA片段的扩增。复性通常在比理论计算的引物和模板的溶解温度低3—5℃的条件下进行。 (3)
PCR扩增
所需的循环数目决定于反应体系中...
PCR
基因
扩增
原理?
答:
(五)可扩增RNA或cDNA:先按通常方法用寡脱氧胸苷引物和逆转录酶将mRNA转变成单链cDNA,再将得到的单链cDNA进行
PCR扩增
,即使mRNA转录片段只有100ngcDNA中的0.01%,也能经PCR扩增1ng有242碱基对长度的
特异
片段,有些外显子分散在一段很长的DNA中,难以将整段DNA大分子扩增和做序列分析。若以mRNA作...
真核生物rt-
pcr
是用cdna吗
答:
RT-
PCR
是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式
扩增
(PCR)相结合的技术.首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段.RT-PCR技术灵敏而且
用途
广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列.作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的...
qpcr原理
答:
四、应用与优势 qPCR技术广泛应用于基因表达分析、遗传疾病诊断、病原体检测等领域。其优势在于高度的灵敏性和
特异
性,能够实现对目标分子的准确定量分析。此外,由于其操作简便、快速高效,使得它在科研和临床诊断中得到广泛应用。总的来说,qPCR技术通过结合
PCR扩增
与荧光信号检测,实现了对DNA序列的实时...
原位PCR原位
PCR的
基本方法为
答:
PCR扩增
是在组织切片上进行的。在切片上直接添加PCR反应液,覆盖后加上液体石蜡,放置在专门设计用于原位
PCR的扩增
仪金属板上,进行循环扩增。某些基因扩增仪具有专门的原位PCR功能。扩增完成后,使用标记的寡核苷酸探针进行原位杂交,以检测特定的基因序列。在此过程中,待检切片上的非
特异
性结合位点会被...
microRNA的茎环引物及其
PCR扩增
的上游引物怎么设计?
答:
我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基,上面有说明的,是为了调整Tm值。上游引物不能全覆盖miRNA,5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应,可以再用软件检查,避免非
特异
性结合 一般自己设计这种miRNA的RT-
PCR
引物需要不断优化,一次成功的机会较小,要做好心理准备。可以选择试剂盒 ...
为什么
PCR
能将特定的DNA片段
扩增
?
答:
根据已知特定的核苷酸序列,来合成的,比如我 已知ACCTG ---TGGAC。 那 高温解旋之后, 复制, 就有 2条:ACCTG ---TGGAC。就这样不停的重复下去, 特定DNA片段就得到复制。要用高耐高温的解旋酶(Taq)
pcr
非
特异
性
扩增的
原因
答:
假阴性,不出现
扩增
条带
PCR
反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与
特异
性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模...
引物设计和探针设计
有什么
区别
答:
引物设计和探针设计(即荧光探针)有3点不同,相关介绍具体如下:一、两者
的用途
不同:1、引物设计的用途:用于
PCR扩增
技术。2、探针设计的用途:用于标记待定的核苷酸片断,用与
特异
性地、定量地检测核酸的量。二、两者的实质不同:1、引物设计的实质:一小段单链DNA或RNA,在核酸合成反应时,作为...
用于基因分型的荧光探针
PCR
原理是什么
答:
基因
扩增
技术(
PCR
)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或
特异
性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA
特异
地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品,因而此方法...
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