请问制备培养基时如何过滤除菌?

Question

实验需要制备几百毫升的培养液,要求过滤除菌,我们的实验室貌似没有人做过这个...
教材上说可以用g6的砂心滤器或蔡氏滤器,不过我这边没找到有卖的...
了解这方面的人能给我一些意见吗?譬如卖滤器的地方(包括邮购)或其他过滤方法等.

Answer 1

1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌

某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

Answer 2

如果体积不是特别大的话(<200ml),找个大号的注射器吸上一管培养基，装上新开包装的0.22微米过滤头(我们用的是Millipore的25 mm 直径Millex Filter，每个小包装都是无菌的。下面那个链接里有)直接过滤就行了。否则要先灭菌滤头。每次怎么也要用几个(因为滤一会儿就堵了)，你应该至少买一盒。要减少过滤中的堵塞，主要是保证你配的培养液澄清没有未溶的其他杂质。

体积再大的话你大概就要用45mm直径的过滤器(但孔径一定也要是0.22微米)和专门的holder。我没用过，我最多一次也就过滤灭菌50ml，一般都是高压灭菌

你们要求全部过滤灭菌是不是里面有对热敏感的物质？如果是这种情况的话你可以这样操作：配置除对热敏感物质外的培养液并且高压灭菌，然后配一个那个对热敏感物质的浓缩溶液并过滤灭菌这个溶液，然后加入已经冷却的培养液中。

参考资料：www.millipore.com/catalogue/module/C7777

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Answer 3

如果体积不是特别大的话(<200ml),找个大号的注射器吸上一管培养基，装上新开包装的0.22微米过滤头(我们用的是Millipore的25
mm
直径Millex
Filter，每个小包装都是无菌的。下面那个链接里有)直接过滤就行了。否则要先灭菌滤头。每次怎么也要用几个(因为滤一会儿就堵了)，你应该至少买一盒。要减少过滤中的堵塞，主要是保证你配的培养液澄清没有未溶的其他杂质。
体积再大的话你大概就要用45mm直径的过滤器(但孔径一定也要是0.22微米)和专门的holder。我没用过，我最多一次也就过滤灭菌50ml，一般都是高压灭菌
你们要求全部过滤灭菌是不是里面有对热敏感的物质？如果是这种情况的话你可以这样操作：配置除对热敏感物质外的培养液并且高压灭菌，然后配一个那个对热敏感物质的浓缩溶液并过滤灭菌这个溶液，然后加入已经冷却的培养液中。

Answer 4

硫酸亚铁加热过滤会分解。
feso4
=加热=
fes
+
2o2↑
2.
feso4
=加热=
feo
+
so2↑
3.
2feso4
=加热=
fe2o3
+
so2↑+
so3↑
所以如果用加热除菌的方法，那么硫酸亚铁就在培养基中起不到作用。因此采用过滤除菌的方法。用滤器把杂质和细菌清楚出去，保证无菌状态，也没有破坏硫酸亚铁的成分。
硫酸亚铁的实验室制法：
1、可以用铁粉与稀硫酸反应直接制得。fe+h2so4（稀）=h2↑+feso4
2、可以用硫酸铜溶液与铁反应获得，反应方程式为：cuso4+fe=feso4+cu（此反应类型为置换反应）

Answer 5

用普通的针式滤器即可。
注射器用大一点，滤器用那种直径大约有4、5厘米的，滤膜用孔径为0.22微米的。全部灭菌。
之后过滤