ta克隆的优缺点

Question

经常会将pcr产物先连到T载体上，再进行后继的克隆构建。为什么要多这一步呢？直接与需要的载体相连不是更简单么？

Answer 1

一、缺点：

1、PCR产物的酶切和判断比较困难。

2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力。

二、优点：

1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法。

2、不需使用含限制酶序列的引物，不需将 PCR 产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理，不需在 PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。

扩展资料：

T-A克隆由于在PCR过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：

1、使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。

2、使用不同的Taq酶，在PCR扩增循环结束后，加上72℃ 10分钟一个过程，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。

参考资料来源：百度百科-T-A克隆

Answer 2

【TA 克隆的优缺点】
1、优点：
（1）是目前克隆 PCR 产物最简便、快捷的方法。
（2）不需使用含限制酶序列的引物，不需将 PCR 产物进行优化，不需把 PCR 产物做平端处理，不需在 PCR 扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。
（3）TA克隆选择灵活，如果一个位点不好使用，同一批质粒还可以用其他酶再切，随时可以扩增。
（4）方便下游作业，比如说要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。
2、缺点：
（1）PCR产物的酶切和判断比较困难。
（2）另外酶切连接过程本身也相当地费时费力。
【TA 克隆】TA 克隆方法（ Original TA Cloning Kit ）即利用 Taq 聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条 PCR 扩增产物的 3` 端自动添加一个 3`-A 突出端。利用 TaKaRa 的 T 载体，直接高效地连接 PCR 产物。随着基因组计划的进行，以及分子生物学技术、基因芯片技术在生命科学研究、生物工程和医学等领域的应用，对 TA 载体的需求量会逐步扩大。

Answer 3

因为TA克隆简单成功率高，大多数的Taq酶都会在PCR产物的末端加一个碱基A，而T载体的缺口有一个凸出的T，正好可以配对，省去了对克隆载体和PCR产物的酶切，而且T载体连接的效率高，操作简单，可进行测序后对正确克隆扩大培养，切下目的片段，用于后续实验，这样得到的目的片段量大而且序列单一准确。

Answer 4

我估计是与碱基互补配对有关，我们老师说过