giemsa染色原理

Question

如题所述

Answer 1

1 染色原理
　　Giemsa染色法 ：吉姆萨染液由天青，伊红组成染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。嗜酸性颗粒碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
　　PH对细胞染色有影响。细胞各成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。
2 介绍
　　MGG由May-Grunwald染料和Giemsa染料组成。前者化学名为曙红亚甲基蓝Ⅱ，对胞质着色较好；后者对胞核着色较好。因此MGG染色，可兼两者的优点，常用于细胞涂片染色。
　　
2.1 1．染液配制
I液的配制：
　　

　　迈格染料 lg
　　甲醇 100ml
　　在研钵内用少量纯甲醇将染料充分研磨成均匀一致的悬液，倒人烧瓶中，加入其余的甲醇后置入37℃温箱4-6小时，每隔半小时研磨半小时，然后放入深棕色瓶内，在室温下保存，2周后使用。临用前取上液40ml，加纯甲醇20ml混合用作工作液。
　　Ⅱ液的配制：
　　姬氏染粉 0.6g
　　甘油 50ml
　　甲醇100ml
　　将姬氏染粉溶于甘油内，在研钵内研磨3-4小时，使之磨匀，加入纯甲醇后搅拌均匀,放入深棕色瓶内，室温下保存，2周后即可使用。
　　磷酸缓冲液配制：1％磷酸氢二钠20ml，l％磷酸二氢钠30ml，加蒸馏水至1000ml，调整pH 6.4-6.8(用蒸馏水代替缓冲液，效果亦佳)。
　　
2.2 2．染色步骤
(1)自然干燥的细胞涂片(预先滴加甲醇固定更好)水平置于染色架上。
　　(2)将I液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)滴盖涂片上，lO-30分钟。
　　(3)倒弃涂片上的I液，自来水漂洗干净。
　　(4)立即滴盖Ⅱ液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)在涂片上染色10-30分钟。
　　(5)倒弃涂片上的Ⅱ液，自来水漂洗干净。
　　(6)趁湿加盖片或待干后镜检。
　　
2.3 3．染色结果
MGG染色将细胞核染成紫红色，细胞质和核仁染成蓝紫色。
　　
2.4 4．MGG染色特点
染色方法简单，且兼有瑞氏、姬氏两种染色的优点，并且涂片可保存十多年而不退色。MGG染色对胞质胞核染色效果均较好，结构清晰，所染细胞亦比HE染色的细胞大；同时对细菌、霉菌及胆固醇结晶的显示也很清楚。因此适用于淋巴造血系统的细胞标本、胸腹水、穿刺标本等。尤其对鉴别恶性淋巴瘤的类型，MGG染色更有帮助。