一、实验步骤：
（1）样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS 洗涤3次。
（2）样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。
（3）染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。
（4）分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。
（5）染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。
（6）吹干或自然晾干细胞 爬片后，中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。
二、注意事项：
1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。
3、切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。
4、在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6、最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。
扩展资料
一、细胞核染色原理：
苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外。
使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
二、细胞浆染色原理：
细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
参考资料来源：百度百科-he染色
HE染色步骤：
1、脱蜡，脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟，事先准备好盖玻片。
2、覆水，100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分钟，自来水冲洗5分钟×3。
3.、苏木精染色5分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。
4、5%乙酸分化1分钟，流水冲洗，用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色变浅了一些，成为蓝色。
5、返蓝：返蓝液，实验室没有，也可不用。
6、伊红染色1分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。
7、脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分钟，可以在通风橱自然晾干再封
片，约5分钟左右。
8、滴上中性树胶，封片，用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖完，避免中间有气泡。
扩展资料：
he染色原理：
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
参考资料来源：百度百科—he染色
zt
一 取材和固定
取材后经固定24小时（4%PA灌注取材的后固定6~8小时）以后，流水冲洗24小时，置于70%~80%乙醇中，可长期保存。
二 脱水和包埋
1、95%ALC（二道） Ⅰ 2~4h
Ⅱ 2h
2、无水ALC（二道） Ⅰ 1.5h
Ⅱ 1h
3、二甲苯+无水乙醇（1：1） 20min
4、二甲苯（二道） Ⅰ 10min
（注：脱水透明esp.透明时间可适当延长） Ⅱ 10min
5、浸软蜡（50~52℃）（二道） Ⅰ 30min
Ⅱ 1h
6、浸硬蜡（58~60℃）（二道） Ⅰ 30min
Ⅱ 30min
7、包埋：注意温度、切面。
三 切片
修、切、展、贴、烤（烤片55~60℃） 3~10h
四 HE染色
1、二甲苯脱蜡 五道，每道5~10分钟
2、无水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
3、95%乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5mn
4、80%乙醇 5min
5、70%乙醇 5min
6、D．W． 3~5min
7、Harris苏木素液 5min（冬天可适当延长，eg.20min）
8、水洗
9、0.5%盐酸酒精分色 3~10seconds，镜下观察
10、水洗蓝化 15~30min（注意换水）
11、70%乙醇 5min
12、80%乙醇 5min
13、伊红液（95%乙醇溶液） 3~30seconds
14、95%乙醇 Ⅰ 1min
Ⅱ 5min
15、无水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
16、二甲苯+乙醇（1：1） 5min
17、二甲苯 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
Ⅲ 5min
18、中性树胶封片。
HE染色注意事项：
1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。
3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。
4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。
苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精（hematoxylin）是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红（eosin）是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。