豇豆轻型斑驳病毒病病原有什么样的名称和病毒提纯方法?

如题所述

病毒名称:豇豆轻型斑驳病毒Cowpea.mild.mottle.virus(CPMMV)。病毒异名:Bean.angular.mosaic.virus、Voandezia.mosaic.virus、Groundnut.crinkle.virus,可能也包括Psophocarpus.necrotic.mosaic.virus。病毒提纯:大豆和克里夫兰烟是最好的提纯病毒的毒源植物。在提纯过程中,采用低分子浓度的碱性缓冲液可以有效减少病毒粒子的凝集。提纯时先将带毒叶片在-20℃下冷冻处理,在0.02mol/L硼酸缓冲液(pH.9.5,用量2ml/g组织)研磨,然后用纱布过滤。10000r/min离心15min。取上清液并加入0.5倍体积的氯仿振动5min,然后在2℃下静置1h。10000r/min离心15min以上,再经75000r/min离心1h沉淀病毒粒子。将沉淀物溶于0.01mol/L硼酸缓冲液(pH.9.5),然后再进行差速离心。将病毒粒子溶于0.01mol/L硼酸缓冲液,冷冻18h。解冻并通过低速离心进行澄清。进一步的提纯可以采用10%~40%的蔗糖密度梯度离心(45000r/min,2~5h)。利用以上提纯程序可以获得2~5mg/kg组织的产量。用下列步骤能提纯病毒:冰冻病叶在0.2mol/L磷酸钾缓冲液,pH.8.0(含2-巯基乙醇和0.01mol/L乙烯联氨四乙酸钠)中匀浆,压出液加正-丁醇和氯仿混合液澄清,水相经差速离心浓缩,再经蔗糖密度梯度(10%~40%蔗糖柱)离心,得部分提纯液(Iwaki.et.al.,1982)。病毒也能经下列步骤:从冰冻病叶组织中提纯,包括压出液氯仿澄清,差速离心从水相沉淀病毒,再经冻、融、澄清病毒悬液,随后10%~40%蔗糖柱梯度离心,得部分提纯制剂(Bruntand.Kenten,1973)。

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