生孢梭菌菌悬液配制后怎么计数

Question

生孢梭菌是用硫乙醇酸盐流体培养基来培养，培养完后用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。那要怎么确定说菌悬液是小于100cuf/ml，有人说要分光光度计、比浊法等，我们没有这个仪器，有没有其它的方法，请指导

Answer 1

用平板计数法也可以，培养基为亚硫酸铁琼脂、sps或TSC这三个都是做厌氧菌的。不过需要36℃培养48小时。厌氧菌当然要厌氧培养。
按照计算菌落总数的方法操作，依次10倍稀释，多做几个稀释度，每个平皿吸取1mL，倾注培养基，培养48小时后，计数。选择满足你的要求那个稀释度，按照这个稀释度稀释你的菌液。典型菌落应该为黑色菌落。
先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了（这个你得自己多做几次平行实验或验证实验，看到底稀释到多少倍。最初不好把握的时候可以同时培养几个临近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h，然后开始计数。生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。
注：如果培养时间太长会产生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。

Answer 2

用平板计数法也可以，培养基为亚硫酸铁琼脂、sps或TSC这三个都是做厌氧菌的。不过需要36℃培养48小时。厌氧菌当然要厌氧培养。
按照计算菌落总数的方法操作，依次10倍稀释，多做几个稀释度，每个平皿吸取1mL，倾注培养基，培养48小时后，计数。选择满足你的要求那个稀释度，按照这个稀释度稀释你的菌液。典型菌落应该为黑色菌落。追问

如果我们没有厌氧的培养环境，那有其它的办法吗？

追答

可以买厌氧产气袋，来代替厌氧温箱。将平皿放入密闭容器内，按容积比例再放入厌氧产气袋，密闭，就可以以。