如何进行草莓病毒的鉴定?

如题所述

采用各种脱毒技术获得无病毒苗后,其植株是否已经真正脱毒,还需进行病毒的鉴定与检测,确认完全脱毒后才可进一步扩大繁殖。草莓病毒的鉴定检测方法有指示植物小叶嫁接法和实验室检测法。其中最常用的检测方法为指示植物小叶嫁接法。

(1)指示植物小叶嫁接法 此方法是用林丛草莓中的UC-4、UC-5、UC-6和深红草莓中的UC-10、UC-11 、UC-12、EMC等作为指示植物,将待检测植株带叶柄的叶片嫁接到检测植株上,观察指示植物新生叶片的发病情况。

①指示植物的准备:将指示植物栽培在具有防虫网的室内,以隔离昆虫,防止病毒的传播。对指示植物抽生的健壮匍匐茎苗要栽入花盆,进行精细管理,使进一步健壮生长发育。如果全年均需要进行病毒鉴定,要在9月上、中旬温度降低后将盆栽苗移入温室中,防止休眠,以保持其全年均处于生长状态,准备随时进行病毒检测。如果要在2月中、下旬以后进行病毒鉴定,可将子苗假植于室外,土壤结冻前移至0℃以上的低温环境中渡过休眠期,1月上旬在温室内盆栽,生长30天左右即可嫁接鉴定。

②嫁接:嫁接时先从待检植株上采集完整、成熟的三片复叶,剪掉三片复叶的左右两片小叶,将中央小叶带1~1.5厘米长的叶柄,用锐利刀片把叶柄削成楔形作为接穗;选生长健壮的指示植物叶片,剪除中间小叶,在两小叶叶柄中间向下纵切1条长约1.5~2厘米的切口,插入削好的接穗,用塑料薄膜条包扎。每株指示植物至少嫁接两个待检接穗。嫁接后把整个花盆罩上塑料袋,进行保温保湿,以提高成活率。嫁接苗在25℃背阴处放置1~2天后移至阳光下,1周后去掉塑料袋。待检接穗和指示植物完全愈合,一般需经过14~20天(秋)或25~30天(春、冬)。嫁接小叶成活后,不断剪去未嫁接的老叶,定期观察新长出叶上的症状表现,以出现的典型症状判别是否仍带有病毒,观察时间可连续1.5~2个月,以确认其是否脱毒。

但是,不同病毒病在指示植物上症状出现的早晚不同,最早为草莓斑驳病毒,一般在嫁接成活后7~14天;其次是草莓镶脉病毒和草莓轻型黄边病毒,分别于嫁接15~30天和24~37天后表现症状。草莓皱缩病毒通常在嫁接成活后39~57天才能表现出来。症状总是先出现在新展开叶片上,然后再在老叶上出现。不同指示植物对病毒症状反应不一,UC-4对斑驳病毒、皱缩病毒和轻型黄边病毒有很好的检测效果,UC-5对多种病毒敏感性较高,UC-10则不能检测斑驳病毒;EMC检测范围广泛,是斑驳病毒、轻型黄边病毒理想的指示植物。

(2)实验室检测法 通过酶联免疫吸附法(ELISA)、双链RNA(dsRNA)分析法、聚合酶链式反应(PCR)和电镜技术,可直接检测感病组织中病毒或核酸的存在。其中以酶联免疫吸附法(ELISA)应用较为普遍。

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