重叠pcr能用于检测基因的定点突变吗

Question

如题所述

Answer 1

采用重
叠延伸PCR的方法将人TGF-β2基因启动子区(-270bp~+280bp)-114bp的5'CGTG3'序列定
点突变为5'TTTG3'，前两次PCR反应产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后无需纯化，直接将胶条切
下置于EP管中，-80?冷冻10min，然后将胶条离心后分别取上清液作为模板进行第三次PCR，
以获得全长的突变目的基因，最后将此突变基因插入报告载体pGL3-Basic进行基因测序。结
果:人TGF-β2基因启动子区突变序列的测序结果与预期完全一致。结论:此方法简便经济、
突变准确，是一种非常实用的基因定点突变方法。