有媒体准备
编制介质有两种方式，第一，你可以选择买在介质中的所有化学品，根据他们的准备的需要;购买商品的良好培养基混合粉的基本成分，如MS，B5。
自己编写可以节省金钱，浪费时间，人力，有时由于质量的药物实验的麻烦。在目前国内的情况，他们的准备。为了方便起见，它是MS培养基，例如，描述了主要的过程来配置介质。
1。准备几个母液
1。下游的MS母液中的一个大的元素数
一般大量元素配制成100倍母液，当使用时，然后，稀释100倍。
称取
NH4NO3165克KH2PO417克
KNO3190克氯化钙·2H2O44克
硫酸镁·7H2O37克
各自的配对1L母液。倒入1L试剂瓶存放在冰箱。
2。 MS微量元素母液的制备
微量元素一般配制成100倍的母液。
反过来权衡
KI0.083克Na2MoO4·2H2O0.025克
H3BO30.62克CuSO4·5H2O的0.0025克
硫酸锰·H2O1.69克氯化钴·6H2O0.0025克
硫酸锌·7H2O0.86克
被称为1L母液，倒入1L试剂瓶存放在冰箱。
CuSO4·5H2O的氯化钴·6H2O，取少量，如果没有平衡精度达到万分之一，可以调节液体配对。
称取
CuSO4·5H2O的0.05克氯化钴·6H2O0.05克
被称为100ml的每一个调整的解决方案，然后取5ml0.0025克量
3。 MS有机母液的制备
一般情况下制定的100倍MS有机母液。
反过来权衡
肌醇10G盐酸硫胺（VB1）0.01克
烟酸0.05克甘氨酸0.2克
盐酸吡哆醇（VB6）0.05克“
被称为1L母液，倒入1L试剂瓶存放在冰箱。
4。要准备MS铁盐母液
一般情况下制定的100倍MS铁盐母液。
反过来权衡
乙二胺四乙酸二钠3.73克硫酸亚铁·7H2O2.78g
被称为1L母液，倒入1L试剂瓶存放在冰箱。
MS母液用大量的元素在母液中，加号MS微量元素母液，MS有机母液和MS铁盐母液，母液8种。
激素母液的准备
各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能被混合在一起，生长素一般先用少量95％乙醇，或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般都是先用1当量的盐酸溶解，并然后用蒸馏水定容耦合。一般取100毫克配成母液100ml的。
2。介质制备
配置1L MS培养基中，例如，进行操作，按如下顺序：
1。将一些蒸馏水的烧杯中。
2。采取上述八的母液10毫升倾。
3。一般称为倒入溶液中，搅拌并溶解30g的蔗糖。
4。用量筒蒸馏水溶解至1L。
5。设计良好的程序添加各种激素，由于少量的激素和激素的植物组织培养的成长至关重要。最好能做到这样一个微小的可调移液器，以减小误差。
6。精密试纸或酸度米，以调节pH值至5.7-5.8。 （能这样做，使用pH计，更精确的）与1当量的盐酸和1当量的NaOH用于调节该溶液的PH值。
1相当于HCL准备的：8.3毫升配成100mL溶液用量筒。
1 N NaOH溶液的制备：精确称取NaOH溶液4克配成100mL溶液。
7。称取5g左右琼脂（好质量琼脂）倒入上述配好的溶液中，并放置在热板上加热至沸腾，直到熔化的琼脂。
8。略有降温，并分为培养容器。无盖的培养容器桁架使用密封薄膜或牛皮纸密封，用橡皮筋或绳子。
9。进入杀菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。
10。除去培养基的灭菌锅灭菌后，在板凳上，使其冷却凝固持平。
二，杀菌
消毒是组织培养的重要工作之一。初学者明确的细菌和疏导区。细菌的区域是：所有的对象中暴露在空气中，暴露于天然水源的目的，至少在其表面上的细菌。因此，未经处理的本地角度来看，无菌室，超净表面的办公桌，简单地煮中，我们使用了刀，切在未处理之前，我们的身体和与外界相连，在该表中，这样的整体外观作为整个消化道，呼吸道，我们呼出的气体，培养容器无论洗得多干净的细菌。
细菌本文所指的，包括细菌，真菌，放线菌，藻类和其它微生物。的的细菌特点是：最小的，无形的。无处不在，在任何时候，无孔不入。病人和强大的自然条件下，生活条件要求简单，繁殖力极强适当的条件下可以被感染。
不育领域是：由高温燃烧，或在一定时间在烹调后，处理后的其他物理或化学的方法的灭菌对象的（当然，这些方法必须已被证明是有效的对象），则上层大气，岩石，健康的动物和植物是不与外部组织接触，强酸，强碱，化学元素灭菌剂的表面和内部是无菌的。从上面的描述可以看出：在地球的表面更小的在世界上比有细菌的，无菌的世界。
灭菌是用物理或化学杀的表面和毛孔中的所有微生物或生物，即全部杀死所有生命物质的方法。与此相关的概念是消毒，这是指杀死，消除或充分抑制一些微生物，因此，它不再是发生了有害的影响，显然经过消毒，许多细菌孢子，真菌厚垣孢子完全杀死后，即生活环境中的微生物消毒和文章，通过严格的无菌操作空间（接种疫苗，洁净工作台）和使用的器皿，以及操作员的衣服和手是没有任何活的微生物。在这样的条件下进行的操作中，它被称为无菌操作。
植物组织培养是非常严格的无菌条件下，甚至超过了微生物的训练要求，这是因为介质是含有丰富的营养物质，稍有不慎，造成了细菌的污染。为了达到完全灭菌的目的，根据对象必须采取不同的有效的灭菌方法，对细菌培养试管苗，以确保能正常生长。
常用的灭菌的物理和化学方法，可分为两类，即：物理方法，例如干热（烘烤燃烧和燃烧），湿热（常压或高压灭菌），射线处理（紫外线，超声波，微波）过滤，洗涤和大量的措施，如无菌水冲洗;化学方法是使用氯化汞，甲醛，过氧化氢，高锰酸钾，来苏糖水，漂白剂，次氯酸钠，抗生素，酒精，化学处理。这些方法和试剂用于不同的目的，根据不同的材料适当选择的工作英寸
1。中湿热灭菌
中等在灭菌工序中的在制备后24小时内完成。高压灭菌原理：封闭蒸笼，蒸汽不能泄露出去，压力上升，不断提高水的沸点，使锅内温度升高。 ，锅的温度达到121℃，0.1MPa的压力下。蒸汽温度可迅速杀灭各种细菌和高耐热孢子。
注意完全排除锅内空气罐的水蒸汽可以彻底消毒。有几种不同的方法到高压灭菌瘪，但目的是为了排出空气，使锅均匀的温度，以确保彻底灭菌。常用的方法：关闭放气阀通电，直到压力上升到0.05MPa，打开放气阀的空气释放，直到压力表指针为零，然后再关闭放气阀门。
关阀重新通电，压力表上升达到0.1MPa时，开始时间，保持0.1-0.15MPa的压力下进行20分钟。
容器的大小，停留时间是不同的，见表。列在表中的数字进行彻底消毒非常保险号码，箱量，但放在小数目，而且还可以减少时间。
三，疫苗接种
接种开放的过程，所以很容易造成污染的时期，这一时期主要是由于空气中的细菌和工作人员的接种室严格消毒的空间。疫苗接种室内保持定期的设备，墙壁，地板上的油漆，洗1％至3％的高锰酸钾溶液。除了紫外线和甲醛在使用前消毒，而且在使用过程中，用70％乙醇或3％的来苏糖儿童喷雾，从而使空气从尘埃颗粒沉淀下来。无菌操作，根据下面的步骤：
1。 4小时前接种甲醛熏蒸接种室和内紫外线杀菌;
2。接种前20分钟，以打开清洁台上的风扇，以及紫外线灯的阶段;
3。疫苗接种第一洗手之间的私人实验室外套和拖鞋到良好的缓冲;
4。在替补出场后用酒精擦拭手中的棉花球，尤其是指甲处。然后擦拭工作表面;
5。棉球用酒精擦拭疫苗接种工具，从开始到结束，然后再次镊子和剪刀火的，然后在培养皿中被烧毁干的尖端重复过度;
6。接种，疫苗接种的双手不能离开桌子，无法说话，走路和咳嗽;
7。干净的工作台上后，可用紫外线灯消毒30分钟连续接种疫苗，强度大消毒一次，每5天注射疫苗。
疫苗接种将已经消毒的根，茎，叶等器官的体外切割过程中，或切成小片或小块，放入介质。现在，程序接种前后连贯的描述。
无菌接种步骤：
1。初步洗涤和切割的材料放入烧杯中，成层流罩，无菌水，然后用消毒剂消毒冲洗，最后沥去水分，除去放置在灭菌纱布或滤纸。
2。材料抽吸一方面在一方面和剪刀或手术刀和镊子，切割材料。如叶，切成0.5厘米见方的小块;包含一节的茎切成小块。微茎尖剥离成1-2片只包含嫩叶茎尖大小。经常烧接种接种的??工艺设备，以防止交叉污染。
3。消毒，用点火装置将切好外植体移植或放置到培养基中。的具体操作（例如在试管中）：第一解包嘴纸，几乎水平保持试管口靠近酒精灯火焰，和旋转喷嘴上方的火焰管，外侧管口燃烧几秒钟分钟。卫生棉条瓣，可的喷嘴燃烧的，取出卫生棉条，然后燃烧喷嘴内。镊子切割外植体放入试管，轻轻插入介质。如果刀片是直接连接到培养基中，将1-3块是适当的。 （尖端向上）的材料置于要放的，除了茎尖，茎段，没有统一的要求。疫苗接种后的喷嘴燃烧的火焰几秒钟。和卫生棉条，我要过度的包内的插件封装好的包口纸纸的。
四，文化
培训是指培养室的培训材料（光照和温度条件下，无菌），生长，分裂和分化的愈伤组织或进一步分化成再生植株。
1。培养方法
1。固体培养
即用琼脂固化培养基发展的植物材料的方法。现在是最常用的方法。虽然该方法设备简单，操作方便，但养分分布不均，增长速度是不平衡的，经常发生褐变中毒。
2。液体培养
即补强剂的液体培养基中的植物材料。由于氧在液体中，通常通过搅拌或振动，以确保氧气的供应，使用往复式摇床或旋转摇床培养的培养液的含量较少，其速度一般为50-100r/min，这种定期浸没方法，无论介质均匀，还确保氧气的供应。
2。孵化步骤
1。原代培养;
原代培养无菌材料和克隆。一些外植体，接种后培养的第一代。的初始培养，通常用于诱导或分化培养基，即含有细胞分裂素和少量生长素的培养基中。初代培养，建立无性系包括：干尖芽丛胚状体和原球茎等。根据在原代培养的发展方向，可分为：
1）开发的顶芽和腋芽
外源细胞分裂素，可以促进顶芽或腋芽休眠侧芽开始生长，从而形成一个微型的多分支芽等小灌木结构。可以在短短几个月内这个的丛生苗适配器亚文化的分支之一，重复芽增殖的培养，并且迅速获得大部分的长矛。零件矛随后被转移到生根培养基中，可以种植成完整植株的土壤。一些木本植物和几味中药可再生繁殖，如玫瑰，山茶花，菊花，康乃馨，等等。这种再现方法也被称为微繁殖，它不经过愈伤组织和再生，它是最克隆的后代可以保持原始品种的再现。
等可再生繁殖的植物，在采样的适用性，顶芽，侧芽或其他如种子萌发的芽茎段也可以树枝。
可以被看作是在这方面的一个特殊茎尖培养。这是非常年轻的顶芽为外植体的顶端分生组织接种。在实际操作中，一些组织，包括茎尖分生组织培养，从而保证操作方便以及容易成活。
一般依赖于训练集芽文化的时间越长节间，直立的茎顶，传播主要用于切割茎段法，如香石竹，矮牵牛，菊花。但特殊情况下，会生出不定芽的形成芽丛。
2）不定芽发育
通过外植体培养不定芽，通常是第一个去的去分化过程中，形成的愈伤组织细胞。然后，在再分化，即，形成由这些分生组织器官原基构成的纵向轴线的器官，它表现出单向的极性（从胚状体，这是不同的）。在大多数情况下，它形成芽，根的形成后。
另一种方式是直接产生不定芽的器官，一些植物长出不定芽的能力，从不同的器官，如矮牵牛，福禄考，树莓等。在体外培养条件下，介质提供营养物质，尤其是在连续植物激素的供应，工厂的产能极大地刺激了不定芽的形成。许多类型的外植体的表面几乎完全覆盖由不定芽。在许多传统的方法不能无性繁殖的类型，在体外条件下能够更容易地产生不定芽和再生，如松科，柏科，银杏，和一些植物。单子叶植物的贮藏器官发生强烈的不定芽百合不定的灯泡可以大量削减。
不定芽文化，也被诱导分化培养基。依靠培养不定芽，一般繁殖，如非洲菊，草莓芽丛的文化。
3）体细胞胚状体发生与发展
体细胞胚胚状体类似，但不同的球形，心形，鱼雷形和子叶胚胎发育阶段，并最终发展成苗。但它是由体细胞。胚状体可以产生的愈伤组织的表面，从表面上的外植体的分化的细胞，也可以产生，或从悬浮液中培养的细胞产生的。
4）在原代培养外植体褐化
植体褐变接种疫苗后，其表面褐变，有时甚至会使整个中褐变现象。它的出现是由于在植物组织中的多酚氧化酶被激活时，留下细胞的代谢变化而引起。布朗宁的过程中会产生苯醌，它们多呈棕褐色，扩散到培养基后，它会抑制其他酶的活性，从而影响了接触外植体培养。
布朗宁的主要原因如下：
不同品种的植物品种褐变现象是不同的。由于多酚氧化酶活性的差异，一些花卉品种外植体接种后一些花卉品种更容易褐变，褐变后接种。因此，在培训过程中，应选择不同品种进行了处理。
B，由于外植体的生理状态的生理状态，因此在接种后的褐变程度也有所不同。在一般情况下，在杨浅从成年植物的外植体收获的植物材料的褐变程度，含醌更因此更严重的褐变。在一般情况下，年轻的组织接种后褐变程度并不明显老龄化组织程度比较严重的接种后褐变。
c中，褐变的无机盐介质组合物的高浓度的程度增加，可能会导致一些观赏植物，此外，高的细胞分裂素水平也刺激一些外植体多酚氧化酶的活性，从而使的褐变现象加深。
e不正确的，如果光线太强烈的文化条件，温度，培养时间过长，可以使多酚氧化酶活性增加，从而加快培养外植体褐化程度。
为了改善率组培苗褐变现象必须加以控制。可以采取以下措施，以防止，减少褐变的发生。
1。一般选择外植体的增长，最好的选择是强有力的外植体，这可以使褐变现象明显减少。
2。的合适的培养条件下无机盐成分，植物生长的物质的水平，适当的温度，可以及时传代培养，以降低材料的褐变现象。
3。在培养基中使用的抗氧化剂，抗氧化剂的使用，如半胱氨酸，抗坏血酸，可以更有效地防止或减轻许多外植体的褐变现象。此外，使用0.1％-0.5％的活性炭，以防止褐变有更加显着的效果。
4。连续转移容易褐变材料可能被分离后的2-24小时的孵育，然后转移到新的培养基中，使连续处理后7-10天，褐变现象将被控制或大大减少。
（2）继代培养
的基础上，原代培养的芽，苗，胚状体和原球茎的数量是不够的，他们需要进一步扩散，使越来越多的，所以发挥快速繁殖的优势。
继代培养，经过几代人之后，原代培养扩大繁殖培养过程。旨在培育了相当数量的无根苗，最终能够达到的边缘繁殖边生根的目的。继代后代几何级数增长。如果两个苗为基础，那么10代后，将产生210苗。
传播法亚文化群包括：切割茎段，芽丛孤立的胚状体分离球茎分开。切割茎段中常用的细长的杆的前端，节间文化是更加明显的。这个方法很简单，并能保持母种的特征。介质往往MS培养基分离芽丛适应生出愈伤组织芽丛。该介质通常是分化培养基中。如果小芽的芽丛。先切成芽丛成小块，继续训练，直到稍微大一点的时间，然后分离到的M??S培养基。
增殖培养基中植物的每一次使用，几乎是相??同的，将培养是接近最有利的环境条件下，营养供应，和激素调节，排除其他生物的竞争，这是可能的几何增殖。
原代培养快速繁殖仅仅是一个必须经过继代培养的过程中，经常停机过程中。达到了相当的数量，应考虑部分转移到生根阶段。从某种意义上讲，扩散，只保留母株，生根的材料转移，扩散到生产出成品。
3。在继代培养的材料的玻璃化转变
实践证明的植物材料时，不断体外传播的一些文化矛，叶片往往呈半透明水的轨道想象这样通常被称为玻璃化。的存在使芽繁殖系数缓慢下降。玻璃成苗生理功能紊乱。
如果不能生根玻璃化矛，因此，大大降低了繁殖系数。在不同的物种，品种，植株玻璃程度的差异。当细胞分裂素水平较高的介质中，但也容易出现玻璃化转变的现象。少量的聚乙烯醇，脱落酸，和其他物质添加到培养基中，在一定程度上减轻玻璃化发生。
提出了玻璃化冷冻试管苗的茎，叶表面蜡质，更高水平的极性化合物在体内，细胞保持液压，植物蒸腾，无法进行正常的移植。这主要是由于空气中的湿度过高，通风不良造成的，其特定的培养容器的解决方案是：
，增加了在培养基中的溶质水平的，在为了降低培养基中的水势;
b目，以在培养基中的含氮化合物的量减少;
C的增加光
d，以增加容器通风，最好的CO2施肥，这种现象减轻玻璃化明显的作用;
低层E孵化温度，变温培养，有利于降低玻璃化现象;
F，在介质中的细胞分裂素含量较低，你可以考虑加入适量脱落酸。
3。生根培养
当物质扩散到一定的数量，这是必要的，使转移生根培养阶段的文化的一部分。如果它不能去的生根培养基培养的问题，它使久不转移苗黄老化或废弃浪费造成的过度拥挤而使无效苗增加。根文化是无根苗生根的过程，这个过程的目的是，生出不定根厚，粗壮。生根培养，1/2或1/4MS培养基，去除所有的细胞分裂素，并添加非生长素（NAA，IBA等）的食物。
生根可以使用下面的方法
，芽碱的溶液中浸渍在50或100 * 10-6IBA处理4-8小时;
B，培养4-6天，在培养基中含有的生长素
C，直接转移到生根培养基中含有生长素。
以上三种方法可诱导芽生根，但前两种方法都更有利的成长和发展的新生根。第三个的胚根生长抑制。原因是，当继续存在较高浓度的生长素在根的原始地层，不利于的胚根生长和发展的。然而，这种方法是比较可行的。
此外，也可以使用下面的方法，可以采取根。 1，延长在增殖培养基中培养时间; 2，拟的增殖放大的人数减少，减少量的细胞分裂素（即将增殖和生根在一个步骤中），切割粗壮的树枝直接发根营养钵，这种方法是不生根阶段。消除了介质生产的需要，切割下来岩屑提供生长素溶液浸渍处理的，但这种方法只适用于一些容易块根作物。
一小部分其他植物生根比较困难，您将需要在介质中放置滤纸桥，使其略高于液面，靠吸水滤纸水分和养分的供应，从而诱导生根。
从胚状体的发展，往往最初分化成苗的根，这个根没有生根阶段和经济增长。但是，通过胚状体的发展，特别是大量的幼苗和个体较小，所以往往需要一个低浓度或没有植物激素，培养一个中等强度的萌芽阶段，才能生根。
体外生根壮苗阶段，为了成功地移植环境以外的试管，试管苗的外部环境条件的适应。温度通常是不同的植物，适合驯养。如菊花，18?20℃为宜。实践证明，植物的生长温度不仅会涉及到蒸腾加强。而且还涉及到真菌有可能增长。温度过低，幼苗生长发育迟缓，或不容易生存。春季低温苗床额外的热线电话，基质温度稍高的温度比2-3°C，这不仅有利于生根，促进根系发育，也有利于推进存活。
移植到植物幼苗在管外的光的强度应比移植前培养改善，并以适应漫射光强度越高，（大约4000lx），维持光合作用所需的光强度。但光线太强烈的刺激蒸腾加强更清晰的冲突造成的水平衡。
驯化的移植
组织培养试管苗移栽过程中的一个重要组成部分，这方面的工作做得不好，会导致前功尽弃。为了做好试管苗的移栽应选择合适的衬底，与相应的管理措施，以确保整个组织文化的工作顺利完成。
植株不育，营养供应的增长，合适的光照和温度接近100％的相对湿度条件下的生理，形态和自然条件，苗情有很大的不同。它必须是通过硬化，如控水，减肥，蓬荜生辉，冷却和其他措施，以使他们能够逐渐适应外部环境，使生理，形态，组织发生相应的变化，使之更适合对自然环境，唯一的办法，以保证植株成功地移植成功。
从植株叶片的角度来看，发达的角质层，叶片通常没有皮毛，皮毛，只是少，或什至出现了大量的水孔的叶片，气孔数量往往超过普通苗。因此，当他们被移植到一试管中，外部环境，更适合高湿度环境下的生长的植株，植株将高失水率是很可能的死亡。因此，为了改善上述不良生理，形态特征的植株，必须是兼容与外界驯化，通常采取的措施：体外渗透油气添加到外面的世界，以增加湿度减弱光，二氧化碳施肥，逐步减少空气湿度。
此外，以进行灭菌栽培驯化矩阵植株生长在一个无菌的环境中，在外面的细菌，真菌较差的韧性。可掺入在培养基材，以改善的存活率，75％百菌清可湿性粉剂200-500倍，进行杀菌处理。
1。移栽基质和容器
矩阵适合种植有透气性，水分和一定的生育力，容易灭菌处理的试管苗，是不利于细菌的繁殖特性，并且可以选择珍珠岩，蛭石，沙子等。为了增加与泥炭土或腐殖质的粘附和生育。定时按比例一般珍珠岩，蛭石，泥炭土或腐殖土比例为1:1:0.5。也可用砂，泥炭土或腐殖质为1:1。这些媒体在使用前，应进行高压灭菌。或至少??小时的烘烤，以消除微生物之一。根据不同植物的种植习惯，制定主要是为了获得满意的修身效果。这里有几个常见的植株栽培基质。
1。河砂
河砂为粗砂，细砂两种类型。砂粒通常称为河砂，并且粒子直径为1-2mm。细砂，这是通常的表面上所述的砂子的颗粒直径为0.1-0.2nm的。河砂的特点是排水，保水能力较差，一般不单独使用，直接苗水库脂肪种植。
2。泥炭土
植物泥炭土沉积在沼泽的残骸经过长时间的衰变形成，水潴留和储存的脂肪和强大的，中性或微酸性反应，但通常不能单独使用，试管苗种植，河砂和其他类型相互混合配成盆土使用。
3。腐殖质
腐烂的枯枝落叶腐殖质形成的。一个自然形成的，人为的，人工瀑布叶片，然后埋在坑里，其灌溉条件保湿，风化，然后过筛，得到。腐叶土包含的特定矿物营养，有机物质，它通常不能单独使用。含腐殖质的培养液中混合有助于发根的植物。
4。容器
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