pcr的通用引物和特异性引物是什么?

如题所述

通用引物,含义为克隆位点两旁的序列匹配,目的是引扩出DNA片段,主要用来测序。而序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。

通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配,或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段,都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序,但是只是“通用”,也不是万能的。

序列特异性引物利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物(C)组成引物系统;在引物延伸时,A与B同时竞争靶序列上同一复性位点,扩增反应后,经凝胶电泳及放射自显影,胶片上的显带是标记同位素的引物所扩增的产物。

扩展资料

设计要求

做Real Time时,用于SYBR Green I法时的一对引物与一般PCR的引物,在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求:

1、避免重复碱基,尤其是G。

2、Tm=58-60度。

3、GC=30-80%。

4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C。

5、正向引物与探针离得越近越好,但不能重叠。

6、PCR扩增产物长度: 引物的产物大小不要太大,一般在80-250bp之间都可;80~150 bp最为合适(可以延长至300 bp)。

7、引物的退火温度要高,一般要在60度以上;

要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。

而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力,即引物应该跨外显子,最好是引物能跨外显子的接头区,这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。

做染料法最关键的就是寻找到合适的引物和做污染的预防工作。对于引物,要有从一大堆引物中挑出一两个能用的引物的思想准备---寻找合适的引物非常不容易。

参考资料来源:百度百科-引物

参考资料来源:百度百科-通用引物

参考资料来源:百度百科-序列特异性引物

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