平末端链接，测序后，顺序经常是反的，怎么避免？

Question

如题所述

Answer 1

这个平末端链接，正反都能有，这个不能避免的，但是可以在测序判断反正。PCR扩增，一端采用载体上的通用引物，另一端采用目的基因上结合的引物，PCR之后根据条带大小就可以看出来了。

Answer 2

由于平端连接的末端没有特异性，连接的时候不能定向，所以两种方向的插入都有可能。这个时候就需要有一种有效的鉴定方法。一般分别在载体和目的片段选择一个酶切位点进行酶切鉴定，当然，具体的鉴定方法要根据具体的实验而定。