4.1大肠杆菌表达系统优缺点
优越性:(1)结构简单,生理生化和遗传背景知识,尤其是其基
因表达调控机制有了清楚的了解;(2)易于大规模培养,成本
低廉;(3)经过了遗传改造,已发展为一种安全的
基因工程实验系统,拥有各种不同的菌株和载体系列。
不足之处(表达真核基因的障碍)(1)真核基因具有
内含子,
所以只能用其cDNA;(2)许多
真核生物基因仅在大肠杆菌中
合成无特异性空间结构的多肽链;(3)许多真核基因的蛋白
质产物,都要经受翻译后的加工修饰,而大肠杆菌缺乏蛋白质
加工系统;(4)大肠杆菌内源性蛋白酶易降解外来的真核生物基因所表达的蛋白质分子;(5)大肠杆菌
细胞膜间隙中含
有大量的
内毒素,痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
5.8植物作为制备基因工程疫苗生物反应
器的优势 ①微生物发酵系统不能对真核蛋白质疫苗进行正确的翻译后加工,有时导致其免疫原性变弱。而植物与动物细胞表达系统,可对表达产物进行转译后加工,保持了自然状态下的免疫原性。
②细菌在发酵过程中常产生一些不溶性聚合物,其要重新溶解并折叠成
天然蛋白质则需要很高的成本,且发酵需要庞大设备投资。
③动物细胞生产基因工程疫苗,常用动物病毒作为载体导入抗原基因,在生产过程中也可能污染动物病毒。
④
转基因植物中的外源基因可通过植物杂交的方法进行
基因重组而达到在植物体内积累多基因的目的。
⑤植物表达系统生产的疫苗可以直接储存在植物种子和果实中,无需冷连系统设备进行储藏运输,故易于长距离运输和普及推广。不仅降低了成本且方便,可随时长期给药。
⑥疫苗抗原基因转入可食用的植物后,可供人直接服用或饲喂动物,不需要分离提纯。这样可节约许多仪器设备,降低
生产成本,使用方便。
⑦粘膜免疫是病毒性腹泻的免疫保护机制,但在启动粘膜免疫方面尚属难题。转基因植物细胞是可以启动粘膜免疫的有效途径。
⑧提供营养。通过转基因植物生产的口服疫苗,不仅提供了疫苗,而且提供了营养。
6.3 动物
1.转基因动物成功率低
阳性率结果重复性差,甚至无法重复,转基因动物的成功率较低。随后的研究虽然使成功率有所提高,但总的成功率还是较低,限制了其应用的发展。建立更完善的转基因方法。使用大的外源DNA片段。
2.造成宿主基因突变问题
外源基因在动物
基因组中的随机整合,可能会引起宿主细胞基因的插入突变、缺失突变及宿主基因的扩增重排和移位,也可能激活正常状态下处于关闭状态的基因,从而导致动物表型的改变甚至造成动物不育或死亡。基因打靶技术(gene targeting)能够使目的基因定点整合,因此避免了对宿主基因的损伤,提高了阳性率。
3.外源基因表达水平不高
转入的外源目的基因在转基因动物中是否高效表达是转基因动物研究成败的关键。对外源基因的整合机理进行深入研究。选择表达效率高的
启动子。
4.安全性问题
插入的外源基因是否会影响宿主动物自身的基因表达及表达水平;转基因动物是否可能会把外源基因传递给生活在其周围的其它种群及环境,造成基因污染;在病毒等致病基因的转基因研究中,不可避免地会产生一些有害的转基因动物,是否可能因为使用转基因动物制品而将一些动物性疾病传递给人类。
将编码活性蛋白的基因导入动物的受精卵或早期胚胎内以制备转基因动物,并使外源基因在动物体内 (乳汁、血液等 )高效表达,然后再分离提取目的基因编码产物。动物就像一个活的发酵罐。其温度、气体、水分和
pH值均由动物自身调节。所以有人把它喻为药物工厂、生物反应器、基因农场或分子农场(molecular farming)。
转基因动物作为生物反应器,其特点有:表达产物能充分修饰且具有稳定的生物活性,产品成本低,并可进行大规模的生产;产品质量高,可诱导分泌,易提纯,不污染环境。来自:求助得到的回答