第1个回答 2017-10-03
朋友你好！
将目的基因克隆进某载体的基本过程如下：扩增目的基因（此时的目的基因连在旧载体上，且基因两侧有多个限制性酶切位点，即处在多克隆位点内，整体呈环形，因为也只有正常环形DNA即质粒能在细菌内扩增）——提纯目的基因，并利用单酶切或双酶切将其切下（此时目的基因呈线性，且两端是酶切过后留下的粘性末端）——酶切新载体（所用酶与酶切目的基因时的一致，此时载体呈线性）——连接目的基因和载体（用T4连接酶，粘性末端之间可以互补配对）——转化新质粒进感受态细胞后用抗体培养基筛选和富集
现在来看这个问题，其实关键所在是你到底用了单酶切还是双酶切（实际操作中二者都用的），单酶切就存在题目中的状况：1.目的基因首尾相连，因为你目的基因两侧是同一个酶切位点，因此产生的粘性末端也能首尾相连 2.载体也是同理
总结一下，关键点在于你要搞清每一步中的基因是线性的还是环状的，其次就是对黏性末端的理解。希望帮到你，欢迎追问~