基因的PCR扩增出现非特异扩增产物，何故？

Question

基因的PCR扩增出现非特异扩增产物，何故？

Answer 1

非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：①必要时重新设计引 物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。本回答被网友采纳

Answer 2

博凌科为-为你解答：当扩增的DNA产物不止一种时，通常与以下几种情况有关：①背景DNA有与引物同源性高的其它位点。可通过在两个引物的内侧序列上再使用另外一对或二条引 物对扩增的产物DNA再做PCP扩增；②退火温度太低。引物与模板的配对是一个动态过程，分子的热运动使引物与模板结合与解离而达到最佳配对位点上。退火 温度太低，造成引物与模板的非特异性位点部分配对而不解离下来，这种不正确的配对，进入PCR反应过程就可扩增出非特异的产物DNA。提高反应的退火温度 （有时此Tm值高出几度）将可改善结果；③过量的酶、引物和dNTP可使PCR反应造成混乱，强行扩增出非特异产物DNA，适当降低这些试剂的量有助于问 题的解决。