具体操作如下:
杀菌曲线的制作
由于不同菌种对紫外线的敏感性不同,因此,在进行诱变处理前,要事先制做紫外线杀菌曲线,即一定
紫外线灯功率与被处理样品间隔一定的距离,不同时间的杀菌率。
(1) 融化固体培养基制平板。
(2) 取已培养好的新鲜
斜面菌种,用无菌生理盐水洗下,接于盛有玻璃珠的100毫升三角瓶中,充分摇动10分钟,使菌体均匀分散,用滤纸过滤,即为菌悬液。
(3) 取上述菌悬浮液计数,调整菌悬浮液密度为108/毫升。
(4) 吸取1毫升菌悬浮液于9毫升无菌水中,稀释后再计数一次,要求达到每平皿菌落数在300个。
(5) 在黑暗条件下进行紫外线照射处理。
(6) 照射处理前,先开紫外线灯20分钟,使灯的功率稳定(如灯的功率为15瓦,则照射距离为15~30厘米,灯的功率为30瓦,则照射距离为30~50厘米)。
(7) 将待处理的菌悬液放于培养皿中,置于电磁搅拌器上,放在紫外线灯正中下方,先将整个平皿照射1分钟后,打开皿盖,此时开始记时并启动电磁搅拌器,准确计算照射时间。
(8) 取样浇平板,经过一定时间照射处理后取样作适当的稀释后,每皿加入0.1毫升,涂布后用黑纸包好,置于37℃恒温培养24~48小时,计数菌落。绘制照射时间与致死率曲线。