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特异扩增PCR的用途
PCR
后出现非
特异
性
扩增
是什么原因
答:
假阴性,不出现
扩增
条带
PCR
反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与
特异
性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模...
什么是实时荧光定量
PCR
?
有什么
作用?请详细说明。
答:
PCR扩增
时在加入一对引物的同时加入一个
特异
性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光...
基因的
PCR扩增
出现非
特异扩增
产物,何故?
答:
非
特异
性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及
PCR
循环次数 过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性
扩增
。其对策有:①必要时重新设计...
PCR的
原理,包括它的
特异
性 分析下PCR的原理,和他的特异性
答:
最基础的原理就是碱基互补配对,其他再详细的在网上很容易查到,我就不说了.关于特异性是因为引物设计的特异性,使引物能和模版上的特定片段配对,在最优条件下
特异扩增
.如果条件变了,也会出现非特异条带的.
为什么做
PCR
前要除去DNA样本中的蛋白
答:
由于逆转录反应使用了引物和模板,也是聚合酶链式
扩增的
(
PCR
是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写)故称为RT-PCR。再说其
用途
:我们提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的...
为什么做
PCR
前要除去DNA样本中的蛋白
答:
由于逆转录反应使用了引物和模板,也是聚合酶链式
扩增的
(
PCR
是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写)故称为RT-PCR。再说其
用途
:我们提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的...
PCR
基因
扩增
原理?
答:
回答:gene amplification 为一
特异
蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下,基因
扩增
是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。在实验室已建立了不等交换...
pcr
做出基因表达增加1000多倍对吗
答:
由于逆转录反应使用了引物和模板,也是聚合酶链式
扩增的
(
PCR
是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写)故称为RT-PCR。再说其
用途
:我们提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的...
“RT-
PCR扩增
目的基因cDNA”需要注意的事项有哪些?
答:
RT-
PCR
是将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式
扩增
(PCR)相结 合的技术。首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA,再以 cDNA 为模板, 扩增合成目的片段。RT-PCR 技术灵敏而且
用途
广泛,可用于检测细胞中基 因表达水平,细胞中 RNA 病毒的含量和直接克隆 特定基因的 cDNA 序列。 作为模板...
细菌的
PCR扩增
为什么要使用细菌基因的16SrDNA通用引物?
答:
保守,在种属水平上不同物种内其16s rRNA具有高度保守性,而在种间他们又具有明显的差异性。因此通过设计引物
扩增
16s rRNA的基因可以
特异
性的得出该细菌是什么细菌(当然有时候还有对获得的扩增产物进行测序)
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