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特异扩增PCR的用途
pcr
做出基因表达增加1000多倍对吗
答:
由于逆转录反应使用了引物和模板,也是聚合酶链式
扩增的
(
PCR
是‘链式扩增反应’polymerase chain reaction 的缩写)故称为RT-PCR。再说其
用途
:我们提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的...
引物设计与探针设计有何区别?
答:
引物设计和探针设计(即荧光探针)有3点不同,相关介绍具体如下:一、两者
的用途
不同:1、引物设计的用途:用于
PCR扩增
技术。2、探针设计的用途:用于标记待定的核苷酸片断,用与
特异
性地、定量地检测核酸的量。二、两者的实质不同:1、引物设计的实质:一小段单链DNA或RNA,在核酸合成反应时,作为...
如何设定PCR引物的保护碱基?如何对
PCR扩增
的产物进行酶切?
答:
一般在
扩增
反应完成后,都需要一步较长时间(10-30min)的延伸反应,以获得尽可能完整的产物,这对以后进行克隆或测序反应尤为重要。4.循环次数:当其它参数确定之后,循环次数主要取决于DNA浓度。一般而言25-30轮循环已经足够。循环次数过多,会使
PCR
产物中非
特异
性产物大量增加。通常经25-30轮循环扩增后,反应中TaqDNA...
特异
引物
PCR
问题
答:
是不是
特异
性引物的设计有问题?在
扩增的
片段中,可以找到多条引物的,参照引物设计规则去设计引物是很重要 的,另外考虑靶基因没有问题吗?
如何提高
扩增
效率和
PCR的特异
性
答:
巢式PCR 使用巢式引物进行连续多轮
扩增
,由于同两套引物都互补的靶序列很少,巢式
PCR的
使用降低了扩增多个靶位点的可能性,从而提高PCR反应的
特异
性和灵敏度 递减PCR 通过在PCR的前几个循环使用严谨的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm高大约5℃的退火温度下开始,然后每个循环降低1℃到2℃,直到...
PCR
后出现非
特异
性
扩增
是什么原因?
答:
PCR扩增
后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现
特异
性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源...
pcr
都需要什么原料
答:
pcr
需要的原料有:物(
PCR
引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(...
探针设计与引物设计的区别是什么呢?
答:
引物设计和探针设计(即荧光探针)有3点不同,相关介绍具体如下:一、两者
的用途
不同:1、引物设计的用途:用于
PCR扩增
技术。2、探针设计的用途:用于标记待定的核苷酸片断,用与
特异
性地、定量地检测核酸的量。二、两者的实质不同:1、引物设计的实质:一小段单链DNA或RNA,在核酸合成反应时,作为...
引物设计和探针设计
有什么
区别
答:
引物设计和探针设计(即荧光探针)有3点不同,相关介绍具体如下:一、两者
的用途
不同:1、引物设计的用途:用于
PCR扩增
技术。2、探针设计的用途:用于标记待定的核苷酸片断,用与
特异
性地、定量地检测核酸的量。二、两者的实质不同:1、引物设计的实质:一小段单链DNA或RNA,在核酸合成反应时,作为...
PCR的
原理,包括它的
特异
性 分析下PCR的原理,和他的特异性
答:
最基础的原理就是碱基互补配对,其他再详细的在网上很容易查到,我就不说了.关于特异性是因为引物设计的特异性,使引物能和模版上的特定片段配对,在最优条件下
特异扩增
.如果条件变了,也会出现非特异条带的.
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