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目的基因片段与载体连接比例
做
连接
的时候如何确定
载体与目的基因
的量,我虽然知道摩尔质量比为3:1...
答:
先算出你的
载体和目的基因
的浓度,(可以跟mark的亮度对比估算,也能用软件计算),再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比,再算出体积比就行
...
目的基因
—目的基因
载体
—载体”是说它们自己
和
自己连起来吗?求详...
答:
此时载体呈线性)——
连接目的基因和载体
(用T4连接酶,粘性末端之间可以互补配对)——转化新质粒进感受态细胞后用抗体培养基筛选和富集 现在来看这个问题,其实关键所在是你到底用了单酶切还是双酶切(实际操作中二者都用的),单酶切就存在题目中的状况:1.目的基因首尾相连,因为你目的基因两侧是同一...
当
载体与目的基因连接
不上时,应该怎么去进行载体优化
答:
当
载体与目的基因连接
不上时,应该去进行载体优化:目的基因具有从起始密码子到终止密码子的方向性,必须正向连接才能获得正确克隆,构建的载体才能正确表达目的蛋白。相同的限制性核酸内切酶及
DNA连接
酶。前者在供体和受体上分别进行切割,使目的基因的两端与运载体有相同的粘性末端,DNA连接酶则将其连接。理...
常用的
目的基因与载体
的
连接
方法有哪些?
答:
这三种方法虽然互有差异,但共同的一点都是利用
DNA连接
酶所具有的连接和封闭单链DNA的功能。 粘性末端DNA片段的连接 DNA连接酶最突出的特点是,它能够催化外源DNA
和载体
分子之间发生连接作用,形成重组的DNA分子。 平末端DNA片段的连接 常用的平末端
DNA片段连接
法,主要有同聚物加尾法、衔接物...
...有一个
基因片段
,未知序列。我可以把它
连接
到T
载体
,然后PCR
答:
这样的T载体可以与taq酶扩增出来的
片段连接
,另一种是平末端的T载体,这种T载体末端没有A,它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接,因为你的序列是未知的,为保万无一失,建议你最好先用taq给它处理下,即末端加A然后再和含有A的T
载体连接
,...
获得
目的基因
后要
与载体连接
,那么目的基因还要剪切过吗?要是不剪切,就...
答:
基因
是
DNA
上的一个片断。剪切的不是基因而是基因前后的两个酶切位点,位于基因两端,对基因不会造成破坏
将
目的基因与载体
混合并用
DNA连接
酶处理后,会出现几种结果,
答:
这要看你的目的基因和载体是怎么处理的:1.单酶切平端,粘端:可能有目的基因自连,载体自连,
目的基因与载体连接
.2.双酶切平端:可能有目的基因自连,载体自连,目的基因与载体连接.3.双酶切粘端:理论上只可能是目的基因与载体连接.
基因
表达
载体
的构建
答:
1、切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶,以获得相同的黏性末端,利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分,其表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子,后须有终止子。2、通过载体把
目的基因片段
导入活细胞。构建基因表达载体也就是把目的基因
和载体连接
,使目的基因...
将
目的基因
构建在表达
载体
上的方法有哪些
答:
有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的
基因片段
酶切,然后
连接
到酶切过的表达
载体
上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上,再从过度载体抢切下
目的基因
,最后再连接到酶切过的表达载体上。
PCR扩增的X
基因片段与
克隆
载体连接
答:
已经得到扩增的
目的基因片段和
克隆
载体
→对两者分别进行酶切(选要相同的限制性内切酶对两者进行切割)→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行
连接
(一般选用T4连接酶)→大肠杆菌感受态细胞的制备(常见的有氯化钙法)→转化(将重组载体导入感受态细胞中)→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板...
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