做连接的时候如何确定载体与目的基因的量,我虽然知道摩尔质量比为3:1,但是如何具体计算,请详细说明

我用的载体是pUC18-T,目的基因为1000bp,目的基因上样量为10ul,亮度与DL2000的1000bp的条带相当,应该为50ng。

先算出你的载体和目的基因的浓度,(可以跟mark的亮度对比估算,也能用软件计算),再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比,再算出体积比就行追问

再根据摩尔质量比和基因的大小算出质量比,这句话我没有看明白,麻烦您给解释一下好吗,谢谢了!

追答

摩尔质量: 载体:目的=1:3
即 载体质量/载体长度(bp数):目的质量/目的长度(bp数)=1:3
即 载体质量/目的质量=1/3 * 载体长度/目的长度
算出质量比后,再根据相对应的浓度算出体积比,然后根据你的体系算出各加多少体积

因为摩尔质量是质量除以相对分子质量,基因是有碱基组成的,假设每个碱基的相对分子质量相等,那么一个基因的相对分子质量就是与他的碱基数成正比,所以就用基因的长度比来代替基因的相对分子质量比

追问

不好意思还得请教一下,如果我得到了质量比,也根据mark的亮度得到了浓度比,之后怎么能得到体积比呢?因为第一次做,思路不太清晰,麻烦您了,谢谢!

追答

假设
载体和目的的浓度分别是:15ng/ul和20ng/ul
你的载体和目的的质量比需要 2/5
浓度=质量/体积
15/20 = 2:载体体积 / 5:目的体积
载体体积/目的体积 = 8/15

温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答  2011-11-04
不需要多精确 最多对连接效率有一点影响 不影响结果 不会说本来能连上结果完全连不上了 反正都还要转化做菌P验证的
相似回答