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载体和目的基因的连接比例
在做基因克隆时,
目的基因
和
载体
相连,可是怎么确定用哪两种酶啊?目的基...
答:
不同的内切酶有自己的特异识别位点 为一小段DNA序列 此段序列双链被解开 分配到上下两段 (形成粘性末端)如果
目的基因
两端含有此序列 则目的基因被切下 限制性内切酶切割DNA片断自然会产生粘性末端(单链片断) 用于
连接
只要将
载体
用同样的内切酶处理产生相同的粘性末端就好了 同源配对后 用连接酶连接...
基因工程操作步骤,将
载体
导入受体细胞之后,
目的基因
是怎么复制的?引物...
答:
目的基因
整合到受体细胞中,随受体细胞的DNA复制而复制。引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。
...请教生物高手。限制酶,DNA
连接
酶是干嘛的?
与
DNA聚合酶有什么不同...
答:
两者都催化磷酸二酯键的合成。限制性核酸内切酶和DNA酶都是是打断磷酸二酯键,但限制性核酸内切酶是识别特定序列后才把DNA切成黏性末端,DNA酶是把DNA分解成单个的脱氧核苷酸,一种限制性核酸内切酶识别相同碱基序列能把
目的基因
和运
载体
都进行切割,形成相同的黏性末端,这样才能拼接。
基因
克隆的基本步骤有哪些
答:
如同聚物加尾,加衔接物或人工接头,PCR法引入酶切位点等,可以获得相应的黏末端,然后进行
连接
,此为修饰黏末端连接。四、导入受体细胞:
载体
DNA分子上具有能被原核宿主细胞识别的复制起始位点,因此可以在原核细胞如大肠杆菌中复制,重组载体中的
目的基因
随同载体一起被扩增,最终获得大量同一的重组DNA...
用DNA
连接
酶讲
目的基因与
运
载体
结合时,有其他不同的结合情况么?》
答:
目的基因
和目的基因
自身相连 质粒和质粒自身相连 目的基因和质粒相连
为什么把
目的基因
导入受体细胞要用
载体
?
答:
游离的DNA进入细胞体,一般会直接被分解,就算可以进行转录——翻译成蛋白,游离DNA也无法跟着细胞分裂进行复制,导致子代细胞中不再含有
目的基因
,也就是说,你费力将基因导入受体细胞,结果只有一个细胞被改变了,整个群体细胞菌落不会有可观察的任何变化.而将基因接入
载体
,由于载体可以在细胞内复制,随着细胞分裂...
克隆
载体和
表达载体的区别
答:
这才便于重组操作。2、表达
载体
:常用细菌质粒进行构建,构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出
与目的基因
相合的末端(多为黏性末端,也有平末端),采用DNA
连接
酶连接,导入生物体实现表达。三、组成部分不同 1、克隆载体:病毒、质粒或高等生物细胞。2、表达载体:目的基因、启动子、终止子、标记基因。
质粒作为
基因
工程中的运
载体
必须要有2个以上的限制酶的切点吗?
答:
做为具有使用性的
载体
,一般最少有2个以上不同的限制性酶切位点,这样能够保证需要插入片段的效率和插入的片段插入的方向性。如果只有一个酶切位点,那在做连接反应时候载体自连现象会非常严重,同时插入片段有可能以2种相反方向插入载体,这样连接成功后还需要筛选方向正确
的连接
体,这样筛选过于困难,没...
基因
工程构建基因表达
载体的
问题
答:
又因为青霉素抗性基因在该特定启动子和终止子之外,无论构建是否成功,都不会影响青霉素的抗性。综上,“
目的基因
-
载体连接
物”的受体细胞具有青霉素抗性但不具有四环素抗性。因此,可以首先利用青霉素抗性筛选出全部连接产物(在青霉素抗性培养基上可以存活),然后再利用四环素抗性进行筛选剔除“载体-载体连接...
DNA聚合酶和
连接
酶有什么区别?请详细说明。
答:
DNA
连接
酶用于基因工程,是在同一种限制酶(有时可能不是同一种,只要形成的末端是互补的就行)取出目
基因和载体
(一般为质粒)被切割后,将目的基因插入载体时,DNA连接酶将
目的基因的
末端(平末端或黏性末端)与载体被切割后形成的末端连接起来,注意是作用于两脱氧核糖核苷酸间的磷酸二脂键而不是作用...
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