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载体和目的基因的连接比例
目的基因与
运
载体
结合是怎么结成环状的啊
答:
http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/200407/20040721042029790.jpg 看这个图吧,我觉得这个图显示的很清楚了。
载体与目的基因
必须用同一种限制酶处理么
答:
没错,只有用同一种酶处理,
载体和目的基因
两端才会形成相同的粘性末端,才能把两者连起来。
...会被整合到受体细胞的染色体上,是只有
目的基因
还是整个?
答:
如果单纯的是在大肠杆菌或者酵母菌内的表达
载体
,
目的基因
是一直存在于载体上的。如果是转入植物或动物,是只有目的基因这一段整合到染色体上。
目的基因
片段
与载体
DNA
连接
的主要形式呢?急…再次感谢!!!
答:
1、黏性末端DNA
的连接
:单酶切黏性末端、双酶切黏性末端、不规则黏性末端 2、平末端DNA的连接:直接连接法、同聚物加尾法、衔接物连接法、DNA接头连接法、PCR法引入酶切位点的连接 1、限制性内切酶链接 2、TOPO克隆(一种克隆技术) 3、网关系统(门户系统) 4、平端连接 ...
为什么粘性末端有利于基因
载体与目的基因的连接
?
答:
一是有氢键连接所以连接的更容易 二是可以选择出特定的序列
的连接
如果是平末端的话有DNA连接酶作用就可以将五碳糖的5‘端和3’端连在一起 而如果粘性末端的话必须有互补的碱基序列才能连接 可以防止质粒
和目的基因的
自身环化
:要将
目的基因
最终克隆到表达
载体
当中,目的基因靠近ATG的末端需要加哪...
答:
特异性 截短gRNAs (trugRNAs)crRNA序列小于20个核苷酸,可以减少脱靶位点突变多达5000倍或更多,而不牺牲
靶基因
组编辑效率。具有17或18个核苷酸的截短gRNA称为“trugRNA”。17个核苷酸是实现有效基因编辑的最小长度。根据经验,还是推荐大家使用18-19bp的trugRNA,有些17bp的trugRNA可能不起作用。(可能...
目的基因
未
连接
到克隆
载体
上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18!!!
答:
目的基因
和
载体比例
最好再核对一下,
连接
时间放久一点试试
载体与目的基因
必须用同一种限制酶处理?
答:
是错吧,如果你切割目的基因和载体的酶属于同尾酶的话,那么它们就会产生相同的粘性末端,切割后的
载体和目的基因
是能够互补
连接
起来的。第二个问题的A答案和D答案不是一样的吗?是不是题有问题啊?应该是直接检测棉花植株里是否还有该抗虫基因是最方便和最常用的方法。8答案应该是A DNA连接酶需要在一...
基因
表达
载体的
构建
答:
1、切割质粒
和目的基因的
限制酶必须是同-.种酶,以获得相同的黏性末端,利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分,其表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子,后须有终止子。2、通过载体把目的基因片段导入活细胞。构建基因表达载体也就是把目的基因和
载体连接
,使目的基因...
目的基因
是什么
答:
2、
目的基因的
克隆。当产生许多拷贝的目的基因后,可以通过酶切反应,将目的基因酶促
连接
到构建
载体
中,然后将整个构建在细菌中表达,从报告基因选取阳性转化体,通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落,做液体培养,提取质粒DNA,进行酶切,切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。3、...
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