00问答网
所有问题
pcr产物的t-vector克隆方法,应注意哪些操作环节
如题所述
举报该问题
推荐答案 2017-01-05
1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆;
2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
当前网址:
http://00.wendadaohang.com/zd/DIerBZBZDI0nZrrITnB.html
相似回答
产生平末端的
PCR产物
可以进行TA
克隆
吗
答:
1 平末端的PCR产物,
首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了
,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆;2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书。比如TAKAR...
ta
克隆
的优缺点
答:
2、不需使用含限制酶序列的引物
,不需将 PCR 产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理,不需在 PCR 扩增产物上加接头,即可直接进行克隆。
PCR的
原理是
什么
答:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经
PCR
扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板-...
如何设计含attb位点的
pcr
引物
答:
因为我们要在E coli 体内表达蛋白
所以设计上游引物时 要在attB位点之前加上SD Shine Dalgarno 序列来保证翻译的准确性
。同时为了保证阅读框的正确性 需要在attB位点之前加上两个核苷酸 但不能是AA AG和GA 因为它们会和attB位点末端的胸腺嘧啶核苷酸T形成终止密码子。 得到PCR产物并电泳检测PCR程序设置和电泳方法同上...
大家正在搜
pcr扩增产物的分析方法
pcr产物克隆意义
Pcr的产物可以再次用来pcr吗
pcr扩增产物克隆
用pcr产物二次pcr
pcr产物做pcr模板
pcr连接产物的转化
pcr克隆的步骤
qrt_pcr和普通克隆
相关问题
传统育苗怎样进行播种,操作中应注意哪些环节?
为什么可以利用t载体对pcr产物进行克隆
PCR产物的检测方法有哪些