急求!蛋白质的沉淀反应是实验报告

1.蛋白质的盐析反应,加饱和硫酸铵,然后倒出少量混浊沉淀,加水,是否溶解沉淀2.重金属沉淀,加硝酸银,去上清液,向沉淀加水3.加有机酸,加三氯乙酸,倾去上清液,向沉淀加水,是否溶解4.向蛋白加九五乙醇

1.蛋白质的盐析反应,加饱和硫酸铵,生成沉淀,静置,然后倒出少量混浊沉淀,加水,沉淀溶解。原因:硫酸铵使蛋白质发生盐析,是可逆沉淀,加水后可以溶解。2.重金属沉淀,加硝酸银,生成沉淀,静置,去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。原因:重金属离子使蛋白质变性,是不可逆沉淀,所以加水后无法溶解。3.加有机酸,加三氯乙酸,生成沉淀,倾去上清液,向沉淀加水,沉淀不溶解。原因:三氯乙酸可提供羟基或者羰基的氢或氧,酸根与带正电荷的蛋白质结合成不溶性物质,是不可逆沉淀。加水后沉淀不溶解。4.向蛋白加百分之九十五的乙醇,乙醇使蛋白质变性,产生沉淀。
(1)可逆沉淀:在温和条件下,通过改变溶液的pH或盐浓度等,使蛋白质从胶体溶液中沉淀出来。在沉淀过程中,蛋白质的结构和性质都没有发生显著变化,在适当的条件下,蛋白质可以重新溶解形成溶液,所以这种沉淀又称为非变性沉淀。可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法,如等电点沉淀法、盐析法(saltingout)等,在低温下使用有机溶剂(如乙醇或丙酮)短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。

中性盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液使蛋白质沉淀析出的作用称为盐析,其原理是高浓度的盐能破坏水化层并中和电荷,从而使蛋白质聚集。使不同蛋白质析出的盐浓度不同,如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出,而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀能够再溶解于低盐溶液,称为盐溶故蛋白质的盐析作用是可逆过程。

(2)不可逆沉淀:在强烈沉淀条件下,蛋白质胶体溶液的稳定性被破坏,使蛋白质沉淀出来。由于这种强烈的沉淀条件同时破坏了蛋白质的结构,产生的蛋白质沉淀不能再重新溶解于水,所以又称为变性沉淀。如加热沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀和生物碱沉定等都属于不可:沉淀。

蛋白质的变性指蛋白质在理(高温、高压)、化化学(酸碱、变性剂)作用下,高级结构遭破坏,其心理化性质和生物功能同时发生改变的过程与现象。变性的蛋白质容易相互聚集形成沉流保是有些情况下,当维持溶液稳定的条件仍然存在时(如电荷),蛋白质并不沉淀。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
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