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目的基因片段与载体连接比例
大肠杆菌
连接载体片段比例
答:
这个比例为1:3或1:5
。通过查询大肠杆菌的质粒信息,目标基因片段与载体DNA的比例应该是1:3或1:5左右,这样可以确保目标基因片段被充分插入到载体DNA中,同时避免过多的目标基因片段导致载体DNA的破坏或不稳定。具体的比例需要根据实验需要进行优化,这个比例的选择会对重组的效果和表达产生重要影响。
做链接时
目的基因和载体
的量控制在多少?
答:
数量一般在 目的基因:载体=5:1-10:1
。双酶切的话,目的基因多加点没关系。目的基因越小,越往10:1上靠;目的基因片段大,反之。不过现在有很多种连接方法,体系不同,具体你还是要参考连接酶的说明书的。
问一个分子生物学的问题,
片段连接
答:
1.片段略长了些,增加了连接的难度,
建议连接时控制一下载体和片断的摩尔比例1:3~1:10
,载体的量尽量少些。2.你的片段如果是PCR产物双酶切后用于连接,建议酶切时间长一些,以保证能完全切开,也就是说你得连接过程要保证没有问题。3.如果一种感受态菌株不行的话,建议你试试其它菌株。4.你得...
载体与片段
的摩尔
比例
如何计算
视频时间 1:10
目的基因片段与载体
质粒的选择?
答:
没有严格的界限的,从100bp--5000bp都可以使用一般的载体的
。太长的使用一般载体的话就不太好连了。按现在研究的微生物目的基因很少有超过5000的。植物基因一般比较长,一般都是构建自己的启动子和转录起始位点,开始用载体克隆各个部分,最后再连到一起,形成一个复制翻译单位。你真正做几个基因,就会...
基因连接载体和片段比例
问题
答:
1:1
...然后
连接
,转化,一直不成功。回收的
片段
很亮。
答:
如果是这样,多挑点(20个)鉴定 2,试试培养基中加1%葡萄糖,以及将片段末端磷酸化试试,都能提高
连接
和转化效率。我觉得,
片段与载体比例
不是根本原因,300bp很好连,而且是T载体,就算比例比较夸张,对你这样的老手也不会转不出阳性。如果你的片段有酶切位点,直接酶切连目标载体试试。
【求助/交流】
目的基因与
表达
载体连接
时有哪些要点?
答:
2.
片段和载体
酶且要完全,确定大小没问题不过有些载体本身就很很难
连接
!建议在连接时,先加入载体和
目的基因
,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。适当延长连接时间24小时以内都没问题的!如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,...
质粒
载体与目的基因连接
时,怎么配置
比例
答:
质粒
载体与目的基因连接
时,怎么配置
比例
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目的基因与载体
的体外
连接
.为什么目的基因要比载体多些?
答:
载体
一般比
目的片段
要长,为了避免载体自
连
,所以应使目的片段多些
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