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载体和目的基因的连接比例
(2)中的“
目的基因
—目的基因
载体
—载体”是说它们自己和自己连起来吗...
答:
此时
载体
呈线性)——
连接目的基因
和载体(用T4连接酶,粘性末端之间可以互补配对)——转化新质粒进感受态细胞后用抗体培养基筛选和富集 现在来看这个问题,其实关键所在是你到底用了单酶切还是双酶切(实际操作中二者都用的),单酶切就存在题目中的状况:1.目的基因首尾相连,因为你目的基因两侧是同一...
用同种限制酶切质粒和含有
目的基因的
DNA,用DNA
连接
酶连接后为什么不会出...
答:
如果是同种酶,结果有如下可能,载体空连,载体和载体互连,
载体和目的基因
相连。通常这种情况下,载体酶切后要用CIP进行末端去磷酸化处理,这样就不能发生载体空连,载体和载体互连的情况了。。实际操作时,其实仍有一定
比例的
载体空连,因为CIP处理并不能达到100%效率。如果有用,请采用。
基因表达
载体目的基因与
运载体结合
答:
首先,以质粒为例,作为常用的运
载体
,它需要通过特定的限制酶进行处理。限制酶在质粒上创造出一个缺口,暴露出其黏性末端。接下来,目标的DNA片段,即
目的基因
,也会被相同的限制酶切割,形成相同的黏性末端(有些限制酶也能产生平末端,同样可以实现
连接
)。当目的基因片段与质粒的黏性末端相匹配时,...
我有一段目的基因,需要构建表达
载体
,此时是扩增
目的基因的
全长还是?
答:
如果你700bp的片段都要表达,你当然要扩增全长啊。你为什么设计得引物只能扩增200bp?
如何提高
目的基因
和
载体的连接
效率
答:
为了防止目的两端
及载体的
两端
连接
在一起,可以用两种限制酶切割
目的基因
两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止目的基因和载体的自连。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
能将
目的基因与载体的
链接方法说的详细一点吗?谢谢!
答:
载体
一般用质粒,质粒是环状的DNA分子。用限制酶将目的基因切下来后,用同样的限制酶去切质粒,这样质粒就变成了一个带缺口的环状DNA,又因为质粒
和目的基因
是用同种限制酶切下来的,所以它们的黏性末端的碱基是相同的,在DNA
连接
酶的作用下,碱基互补配对,DNA连接酶连接的是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键...
常用的
目的基因与载体的连接
方法有哪些?
答:
第三种方法是,先在DNA片段末端加上化学合成的衔接物或接头,使之形成粘性末端之后,再用DNA连接酶将它们连接起来。这三种方法虽然互有差异,但共同的一点都是利用DNA连接酶所具有
的连接
和封闭单链DNA的功能。粘性末端DNA片段的连接 DNA连接酶最突出的特点是,它能够催化外源DNA和
载体
分子之间发生连接作用...
目的基因的连接
物是什么?
载体
的连接物是什么?
答:
你最好在了解基因工程原理基础上、根据实验程序和步骤来了解这些名词含义,仅仅单纯说一个名字很可能导致含糊不清,因为有些名词只是 某实验室内交流的口头语用或习惯用语 而不是科学用语.我猜你这里说的“
载体连接
物”说的是
载体和目的基因
片段,在酶切后连接产物中的一种,指的是原本被切开的载体本身并...
怎样确定
目的基因
正向
连接
答:
导致密码子全部改变,目的基因不能正常表达。为了防止出现反连现象,实验中常用双酶切的方法。如果
目的基因连接
反了,就不能表达了,原因是基因表达
载体
上面有基因表达需要的部件,例如启动子等,即有方向性。假如是一种限制性核酸内切酶来切割重组的基因表达载体,就需要用一定的方法进行筛选。
基因表达
载体的目的基因与
运载体结合
答:
将目的基因与运
载体
结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体,首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的
目的基因的
片段插入...
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