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载体和目的基因的连接比例
载体
构建摩尔比怎么算
答:
目前制备3′T载体的方法是先用平末端限制性内切酶(如EcoRⅤ)酶切载体,再用TaqDNA聚合酶在仅有dTTP的情况下,72~75℃反应,在3′末端添加一个T[1,3]。但是,实际反应过程中,由于3′末端加T为非优先聚合核苷酸,仅部...>> 问题六:
连接
体系中确定的
载体与
外源
基因
之间的摩尔
比例
关系是固定不变的吗...
影响
目的基因与载体连接
效率的因素有哪些
答:
载体大小因素,连接酶的活性因素。1、载体大小:载体越大,
载体与目的
片段
的连接
效率越低,所以对于较大的载体用同源重组连接成功率最高。2、连接酶的活性:连接酶的活性对连接效率也有影响。
...为什么先将含有
目的基因的
表达
载体
提纯,并使DNA浓度保持在1~3μ...
答:
如果你是高中生,先这么记着吧,应该还没有高考考这么高级的。如果你是大学生,那么是这样的:含有
目的基因的
表达
载体
在感染细胞之前,需要进行扩增,然后再提取载体。在这个过程中,载体经常会受到蛋白或者有机溶剂等的污染,而这些东西对于细胞是由毒害的,所以在感染细胞之前,要先除去载体中的这些杂质...
我们在做绿色银光蛋白GFP的克隆与表达时,用到的办法是酶切法,质粒分别...
答:
通常来说,胶回收和NaAc乙醇沉淀得到的片段应该测浓度或者检验电泳的。毕竟胶回收或者乙醇沉淀都会有损失,而且有时候这类纯化方法收不到核酸。另外下一步
连接
的时候需要对
基因
片段和
载体
进行定量,应该是3:1的时候连接效果比较好。所以才有了定量这一步,个人觉得测浓度和电泳必须做一个,要不连接比较不...
配制DNA连接反应体系中,如何确定
目的基因与载体
DNA的量以确保高
的连接
...
答:
在做
目的基因的
提取的时候可以使用荧光pcr来检测目的基因的含量。
【求助/交流】
目的基因与
表达
载体连接
时有哪些要点?
答:
建议在
连接
时,先加入
载体和目的基因
,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。适当延长连接时间24小时以内都没问题的!如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,失活残留的酶,适当加大
目的基因的
量(10以内),连接温度也可以在4-16度...
第二题中,什么是
目的基因与载体
之间的反向
连接
,为什么避免这个可以...
答:
目的基因
具有从起始密码子到终止密码子的方向性,必须正向
连接
才能获得正确克隆,构建的
载体
才能正确表达目的蛋白。
目的基因连入
载体
转化到大肠杆菌中
目的基因的
大小怎么计算
答:
④比较第4组和第5组实验结果可知,实验中用碱性磷酸酶处理
载体
可以降低仅有载体的菌落数,增加携带重组质粒的菌落
比例
.故答案:(1)含
目的基因的
DNA与载体(或质粒) DNA
连接
酶 氨苄青霉素(2)①大肠杆菌感受态细胞和平板培养基 ②摄取载体(或质粒、外源DNA) ③DNA连接酶和限制 碱性磷酸 ④重组质粒...
目的基因与
运
载体
结合所需的条件是 ___。
答:
同一种限制酶 具有标记
基因的
质粒
目的基因
DNA
连接
酶 ATP
我的
目的基因
550bp,
载体
为T载体,
连接
后转菌挑单克隆,菌液PCR条带在1000...
答:
正常情况应该是750bp,其他的都不是,可以忽略不记
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