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简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理
如题所述
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推荐答案 2012-01-08
T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端。基于这个原理,常规的线性T-克隆载体(PUC18和PUC19等)在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端位点。这个就是T克隆的原理了。
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其他回答
第1个回答 2012-01-20
PCR产物末端都有A尾巴,与T-A克隆载体上的T互补连接到载体上
相似回答
TA
克隆的
具体
原理是什么
?
答:
TA克隆方法(OriginalTACloningKit)把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法
。因为PCR反应中所使用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3'加上A。例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’-T突...
T载体克隆
实验
原理
答:
T载体克隆实验的原理主要涉及重组质粒的构建、感受态细菌的制备以及β-半乳糖甘酶显色反应的选择法
。首先,构建重组质粒是通过DNA连接酶,如T4噬菌体DNA连接酶或大肠杆菌DNA连接酶,将经过酶切的载体与外源DNA片段连接起来。T4噬菌体DNA连接酶可连接粘性末端和平末端,但平末端连接效率较低,通过调整酶浓度...
T载体克隆的
实验
原理
答:
很多DNA聚合酶在
进行PCR
扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-
T载体
是一种已经线性化的载体,载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样,pUCm-T载体的两端就可以和
PCR产物的
两端进行正确的AT配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中,形成含有目的片...
pCR产物克隆
,为什么要克隆
答:
回答:
T载体
又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接. 很多DNA聚合酶在
进行PCR
扩增时会在
PCR产物
双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3’端带有一个突出的...
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